| 主权项 |
1、一种通过冷凝酯低温包埋的硬组织的制片方法，它包括下列步骤：A、对骨组织用金刚沙片切锯成1～2cm的厚度，切锯的过程中流水冲洗，完成后放入预冷的固定液中，4℃保存；B、冲洗好的样品进行酒精梯度脱水：30％-50％-60％-70％-85％-90％-95％-100％-100％，均在4℃中进行，每个浓度时间为2～3小时，压力为-0.64大气压的间歇抽真空，15分钟/小时；C、脱水完成后，放入渗透中间液：冷凝酯基础原液/二甲苯的体积比为1∶1中1小时，4℃，然后放入渗透液：冷凝酯基础原液/聚乙二醇-400体积比为100∶2，渗透液中含有1.5％干燥处理过的过氧化苯甲酰，时间为2小时，温度为4℃，间歇抽真空；D、将渗透好的组织放入包埋瓶中，加入新鲜包埋液：冷凝酯基础原液/聚乙二醇-400/N N-二甲基苯胺的体积比为100∶5∶1，内含3％过氧化苯甲酰，放入-20℃冰箱中，聚合时间为3～5天；E、聚合完成后，破碎包埋瓶，取出包埋块，在硬组织切片机上进行切片，切片厚度为5um，利用超薄切片机上进行超薄切片，用作透射电镜观察，5um切片附于明胶镀膜过的载玻片上，在37℃温箱中干燥48小时；F、染色处理，以免疫组化染色，将切片放入乙二醇乙醚醋酸酯，时间为2小时，中间应更换乙二醇乙醚醋酸酯在二甲苯中放置20分钟，中间更换二甲苯二次，切片进行酒精梯度回水：100％-95％-90％-85％-70％-60％-50％-30％-水，进行免疫组化染色；所述的冷凝酯基础原液是：1)甲基丙稀酸甲酯要经过清洗来去除所含的阻断剂：a)500ml洗涤液：1升蒸馏水，200g氯化钠，50g氢氧化钠，加入盛有500ml甲基丙稀酸甲酯的分液漏斗中；b)摇晃，静置至分层；c)放弃底部溶液；d)重复a、b、c步骤二次；e)用蒸馏水500ml洗涤二次；f)将甲基丙稀酸甲酯转入塑料瓶中，加入50g氯化钙；g)摇晃5～10分钟，吸干甲基丙稀酸甲酯中的水分；h)用双过滤纸过滤甲基丙稀酸甲酯；i)放入4℃冰箱中备用；2)将MMA和甲基丙烯酸羟乙基酯的体积比为8∶2混合，放入4℃冰箱中保存。 |
