多氧霉素B的定量分析检测方法

摘要

本发明公开了一种多氧霉素B快速定量分析的检测方法，该检测方法包括：建立牛津杯法测定多氧霉素B的条件，并用多氧霉素B的标准溶液在生物检测条件下绘制一条线性回归曲线，然后利用牛津杯鉴定各阶段的发酵液所产生的抑菌圈大小，从而测得多氧霉素B在发酵液中的含量。本发明解决了目前在工业发酵生产多氧霉素B中存在的检测不方便、HPLC方法操作繁琐、劳动强度大、分析时间长、费用较贵等缺点，本方法可用于工业化发酵生产的多氧霉素B的检测中。

主权项

1、一种多氧霉素B的定量分析检测方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)确立牛津杯法测定多氧霉素B的生物检测条件：平板厚度为底层培养基20mL，上层培养基5mL；培养温度为30-32℃；牛津杯的加液量为200μL；加菌层培养基的菌悬液浓度为5×106cfu/ml；(2)标准曲线的建立：在步骤(1)的生物检测条件下，取多氧霉素B的标品和样品溶于缓冲液中，用牛津杯法测定在不同浓度时抑菌圈的直径大小，并用抑菌圈直径为横坐标，多氧霉素B浓度的对数值为纵坐标，绘制标准曲线；(3)产多氧霉素B菌株的摇瓶发酵及发酵液的后处理：将产多氧霉素B的菌株的孢子在固体培养基上培养至孢子成熟，然后将成熟孢子接种于种子培养基中，摇瓶培养后再将活化的种子接种到发酵培养基中培养并取样，最后将发酵液离心并用氯仿抽提；(4)牛津杯法测定发酵液中多氧霉素B的含量，步骤包括：在平板上加20mL底层培养基和5mL加菌层培养基，在加有底层和加菌层培养基的平板上放置牛津杯，然后将步骤(3)中所述经氯仿抽提处理后的发酵液滴加到牛津杯中，其中牛津杯的加样量为200μL，随后将滴加抗生素的平板放入培养箱中在30-32℃下进行培养，最后用游标卡尺测量抑菌圈的直径，根据标准曲线测得多氧霉素B在发酵液中的含量。