抑制弓形虫wx2基因表达的siRNA及其应用

摘要

本发明具体涉及一种抑制弓形虫wx2基因表达的siRNA及其在筛选弓形虫弱毒或减毒活疫苗中的应用。针对弓形虫wx2基因(GenBank登录号为AY238892)的895～913位序列设计一对各含有9个碱基回文结构的60核苷酸发夹状DNA，应用该发夹状DNA构建干扰质粒并经电穿孔法导入弓形虫体内，获得体内能持续表达siRNA分子的RNA干扰虫株wx2b－i，动物感染实验表明其毒力显著减低，攻击的小鼠存活时间明显长于阴性对照和野生型虫株，有望开发出家畜和宠物用弱毒或减毒活疫苗。

主权项

1、抑制弓形虫wx2基因表达的siRNA，其特征在于，设计并体外合成以下双链DNA，构建逆病毒表达载体并导入弓形虫体内，获得体内持续表达的siRNA分子，所述双链DNA的碱基序列为：正义链：5′-GATCCCCCATCCGTAAAGCGGTGAGTACTCACCGCTTTACGGATGTTTTTA-3′；(SEQ ID NO.5)反义链：5′-AGCTTAAAAACATCCGTAAAGCGGTGAGTACTCACCGCTTTACGGATGGGG-3′；(SEQ ID NO.6)干扰位点为wx2序列的895～913位的19个核苷酸，方框内为为回文结构。