一种在多孔硅胶上固定漆酶的方法

摘要

本发明涉及到将漆酶固定到一种多孔硅胶载体上的方法，属于环境微生物领域。该方法以层析用多孔硅胶为载体，通过共价结合的方法将漆酶固定在功能化多孔硅胶载体上。其固定的方法包括两个步骤：载体的制备和漆酶的固定。载体制备是将多孔硅胶与一定量的戊二醛水溶液混合，在真空超声下反应，制备出可与漆酶共价结合的功能化载体；漆酶的固定是在4摄氏度下，pH＝7.0的缓冲溶液下先固定漆酶12小时，洗涤、低温干燥后得到固定化的漆酶。本发明提供了一个高稳定性、高活性的固定化漆酶，制备方便，迅速、成本低廉。

主权项

1.一种在多孔硅胶载体上固定化漆酶的方法，其特征在于：包括步骤如下1)载体的制备(a)多孔硅胶先用1摩尔/升的盐酸浸泡8-12小时，然后在60-80℃下烘干；(b)称取所需的烘干后的硅胶置于三角瓶中，向其中加入体积比为3∶1的γ-氨丙基三乙氧基硅烷和甲苯混合液，将三角瓶连入冷凝回流装置，氨基化8-12小时；(c)将氨基化的硅胶依次用甲苯、蒸馏水和无水乙醇各清洗3-4次；(d)将2.5％-5％质量分数的戊二醛水溶液与所需的氨基化硅胶充分混合，置于真空抽气装置；(e)在真空状态下超声反应30分钟；(f)置于常温常压下静置30分钟；(g)将嫁接上醛基的多孔硅胶载体低温干燥，即获得固定化用的多孔硅胶载体；2)漆酶的固定化(a)将步骤1)中得到的干燥多孔硅胶载体与溶于pH＝7.0磷酸缓冲溶液的漆酶充分混合，置于垂直混合器上于4℃条件下固定12小时；(b)用pH＝7.0磷酸缓冲溶液洗涤，并收集洗涤液，直到洗涤液中没有蛋白检出；(c)将固定化好的漆酶放置在pH＝8.0乙醇胺-盐酸缓冲溶液中静置2小时；(d)将静置后的固定化漆酶用pH＝7.0的磷酸缓冲溶液洗涤若干次，然后低温真空干燥制备成固定化漆酶成品。