重组耐高温超氧化物岐化酶的高密度发酵与纯化工艺

摘要

一种重组耐高温超氧化物岐化酶的高密度发酵与纯化工艺，所述的构建方法包括：以嗜热菌中编码SOD的基因为模板，设计带有限制性酶切位点的特异引物扩增目的基因，经双酶切后连接于经相同酶切处理后的质粒载体pET28a中，构建重组质粒，命名为pSOD，然后经化学转化法将质粒pSOD转化至感受态大肠杆菌BL21(DE3)，经筛选，获得高产SOD的菌株，完成SOD工程菌的构建；所述的发酵工艺：发酵过程经过一级种子培养、二级种子培养、上罐发酵、诱导表达四个步骤，最终获得发酵产物——SOD；本发酵方法可以实现SOD的高效表达，目的蛋白的表达量占菌体蛋白总量的60％以上；它具有SOD有良好热稳定性与耐热性，表达产物占全菌蛋白的60％以上，且全部为可溶性蛋白，避免了包含体复性过程的种种麻烦；纯化工艺简单，产率高，成本低廉，终产物SOD的纯度高、活力高、稳定性强等特点。

主权项

1. 一种重组耐高温超氧化物岐化酶的高密度发酵与纯化工艺，它包括：以嗜热菌中编码SOD的基因为模板，设计带有限制性酶切位点的特异引物扩增目的基因，经双酶切后连接于经相同酶切处理后的质粒载体pET28a中，构建重组质粒，命名为pSOD，然后经化学转化法将质粒pSOD转化至感受态大肠杆菌BL21(DE3)，经筛选，获得高产SOD的菌株，完成SOD工程菌的构建。