一种从琼脂糖凝胶中回收DNA的方法

摘要

本发明涉及一种从琼脂糖凝胶中回收DNA的方法，这种从电泳后的琼脂糖凝胶中回收DNA样品的方法，它依次包括如下步骤：首先制备楔型的条状吸水材料，然后插入凝胶中吸出DNA样品，再经离心收集、DNA吸附、DNA洗涤、DNA洗脱等；本发明克服了现有方法中切胶回收的繁琐操作和在操作多个样品时易交叉污染的缺点，提供一种从电泳后的琼脂糖凝胶中回收线性或环状DNA的方法，能在15min内从琼脂糖凝胶中回收纯化目的DNA片段，且纯度很高，能满足后续的分子克隆、酶切分析、标记和PCR等操作；本发明使用的器材简单、操作简便，回收率高、成本低，可以试剂盒化。

主权项

1、一种从电泳后的琼脂糖凝胶中回收DNA的方法，其特征是依次包括如下步骤：1)吸水材料制备：将硬质吸水海绵裁成3mm×3mm×10mm，下端为楔型的条状物，并事先经过消毒灭菌；2)样品吸出：电泳后，在紫外灯照射下将制成楔型的强吸水材料条对准目的DNA条带插入凝胶中，待其吸收15～30秒后，可见发出荧光的DNA条带被吸入其中，然后拔除；3)离心收集：将此吸水材料放入带有漏斗的离心管中，以15000rpm速度离心3～4分钟，即可将DNA溶液从中离心脱出来；完成这3步所制得的DNA样品就可用作PCR模板、酶切、分子克隆等实验操作，若需进一步去除杂质，可将回收DNA溶液采用如下纯化操作步骤：4)DNA吸附：将DNA回收柱放置在离心管中，将离心收集溶液移入回收柱纯化膜上，室温下放置2分钟，以10000～12000rpm速度离心1分钟，弃离心管底部液体；5)DNA洗涤：在DNA回收柱中加入成份为10～20mmol/L pH8.0的三羟甲基氨基甲烷与无水乙醇为1∶2至1∶4混合的DNA洗涤液500～800μl，以10000～12000rpm，离心1分钟，弃离心管底部液体，重复操作1次，将DNA硅胶吸附柱重新放入离心管中，以10000～12000rpm速度离心2分钟；6)DNA洗脱：将DNA回收柱移入一只新1.5ml离心管中，向DNA回收柱纯化膜中央加入30～40μl预热至37℃的TE溶液或用去离子水洗脱，在室温下放置2分钟，然后12000rpm离心2分钟，离心管底的液体即为琼脂糖凝胶中回收的DNA溶液，可直接用于后续实验，也可-20℃保存备用。