一种链球菌特异性噬菌体裂解酶的生产方法

摘要

本发明涉及一种链球菌特异性噬菌体裂解酶的生产方法。该裂解酶由重链(约50kDa/条)PlyCA、轻链(约8kDa/条)PlyCB以1∶8的比例构成，其基因名称为PlyC，具有下述核苷酸序列：序列表中PlyCA(序列1)和PlyCB(序列3)的DNA序列，两者分别编码了序列表中PlyCA的氨基酸序列(序列2)和PlyCB的氨基酸序列(序列4)。本发明采用大肠杆菌表达体系，分别构建含裂解酶重链和轻链基因PlyCA和PlyCB的重组质粒，转化至BL21(DE3)细胞，发酵培养工程菌，使PlyCA和PlyCB得到高效表达。表达产物经纯化、复性，获得了链球菌噬菌体裂解酶PlyC。本发明的生产方法与常规方法相比，具有生产成本低廉、产物复性率高、产物活性强、生产方法安全、可满足大规模生产的优点。

主权项

1.一种链球菌特异性噬菌体裂解酶的生产方法，其特征在于包括如下步骤：1)扩增如下核苷酸序列所述的链球菌特异性噬菌体裂解酶PlyC的基因PlyCA和PlyCB，序列表中PlyCA和PlyCB的DNA序列，其分别编码了PlyCA和PlyCB的氨基酸序列。2)构建PlyCA和PlyCB的重组表达载体；3)将重组表达载体分别转入宿主细胞，获得表达链球菌噬菌体裂解酶PlyC重链PlyCA和轻链PlyCB的工程菌；4)发酵培养表达链球菌噬菌体裂解酶PlyC的重链PlyCA和轻链PlyCB的工程菌，诱导表达获得重组基因表达产物；5)将上述重组基因表达产物，经纯化分离、复性，得到链球菌特异性噬菌体裂解酶PlyC。