发明名称 |
一种人分化抑制因子3表达载体、融合蛋白及其制备方法 |
摘要 |
本发明属于基因工程和医学生物领域,公开了一种人分化抑制因子3表达载体、融合蛋白及其制备方法。该表达载体是将PCR扩增后的hId3基因克隆于融合表达载体pET32a的EcoR I和Sal I位点之间,得到重组表达载体hId3/pET32a。本发明将hId3编码基因定向克隆到原核表达载体,获得hId3融合蛋白表达载体,实现了hId3在大肠埃希菌中的高效表达,表达量占菌体总蛋白的27%,同时提供了一整套工程菌诱导表达和纯化工艺,并以hId3融合蛋白为免疫原制备兔抗hId3多克隆抗体,为进一步研究hId3蛋白的生物学功能及其在临床医学诊断中的应用奠定基础。 |
申请公布号 |
CN101275147A |
申请公布日期 |
2008.10.01 |
申请号 |
CN200810025405.5 |
申请日期 |
2008.04.30 |
申请人 |
中国人民解放军南京军区南京总医院 |
发明人 |
李晓军;贾丽;仲爱芳;虞伟 |
分类号 |
C12N15/70(2006.01);C12N15/12(2006.01);C07K19/00(2006.01);C07K16/18(2006.01) |
主分类号 |
C12N15/70(2006.01) |
代理机构 |
南京天华专利代理有限责任公司 |
代理人 |
夏平;刘成群 |
主权项 |
1、一种人分化抑制因子3的表达载体,其特征是将PCR扩增后的hId3基因克隆于融合表达载体pET32a的EcoR I和Sal I位点之间,得到重组表达载体hId3/pET32a,其中hId3基因上游融合了6个组氨酸和硫氧还原蛋白基因片段,利用His标签与Ni离子的亲和作用,融合表达出的蛋白产物用Ni-NAT树脂进一步纯化,hId3与Trx的融合表达增加表达产物的可溶性,携带Trx-His-hId3融合基因的hId3/pET32a处于pET32a的T7启动子控制之下,融合蛋白基因中的外源蛋白基因与Trx之间还具有肠激酶和凝血酶的识别位点,便于从融合蛋白中切下Trx。 |
地址 |
210002江苏省南京市中山东路305号 |