乙型肝炎病毒基因分型的荧光PCR检测方法及其试剂盒

摘要

本发明涉及一种乙型肝炎病毒(HBV)基因分型的荧光PCR检测方法及其试剂盒。其方法特征在于，从GenBank中找出已作基因分型的HBV DNA全序列进行序列联配；根据序列联配结果找出HBV基因型的型特异性碱基的聚集区域；根据型特异性碱基的聚集区域设计探针和一对引物。在该探针和引物的存在下，在荧光PCR仪中，对从血清样品提取的HBV DNA进行PCR扩增实现HBV基因分型检测。本发明还提供了用于本发明方法的试剂盒和型别阳性标准品。本发明方法分型准确度达到98％，通过调整反应条件可达到100％；比全序列分析简单快捷，实验流程少，耗时短，费用低，又比常规的PCR及RFLP相关的方法快捷，准确，而且本发明方法封闭式的检测能有效地避免污染。

主权项

1. 一种乙型肝炎病毒基因分型的荧光PCR检测方法，是在按下述方法设计得到的探针和对应引物的存在下，在荧光PCR仪中，对从血清样品提取的乙型肝炎病毒DNA进行PCR扩增，实现乙型肝炎病毒基因分型检测；所述的探针和引物的设计方法如下：(1)序列联配：从GenBank中找出已作基因分型的乙型肝炎病毒DNA全序列进行序列联配；(2)根据序列联配结果找出乙型肝炎病毒基因型的型特异性碱基的聚集区域，所述的特异性碱基是指乙型肝炎病毒基因各型在同一位置上各自相对于其他型而异的碱基，所述的型特异性碱基的聚集区域是指100bp内至少有6个以上的型特异性碱基；(3)根据型特异性碱基的聚集区域确定型特异的乙型肝炎病毒DNA序列片断；(4)根据型特异的乙型肝炎病毒DNA序列片断设计探针；(5)根据探针设计引物。