DNA分子内杂交－聚丙烯酰胺凝胶电泳方法

摘要

一种用于检测已知基因点突变的DNA分子内杂交-聚丙烯酰胺凝胶电泳方法，所用的引物是DNA分子内杂交探针及与之相连的引物。本发明的方法，特异性高，成本低，简便易行，无需使用放射性同位素，已成功用于检测已知的上一种β地中海贫血基因点突变和两种α地中海贫血基因点突变，即，-28(A-G)、-29(A-G)、CD17(A-T)、CD26(G-A，HbE)、CD30(A-G)、CDs41/42(-TTCT)、CD43(G-T)、CDs71/72(+A)、CD95(+A)、IVS-I-1(G-T)IVS-II-654(C-T)以及CD125(CTG-CCG，Hb Quong Sze)和终止密码子(TAA-CAA，HbConstant Spring)的检测。

主权项

1. 一种DNA分子内杂交-聚丙烯酰胺凝胶电泳方法，将一段长约7-15bp的寡核苷酸片段作为DNA单链分子内杂交探针连接到PCR引物的5’端，对靶DNA片段进行PCR扩增，由此在同一条DNA单链上产生探针及其靶序列的两个互补序列；其特征是分子内杂交探针与突变的碱基序列互补；若在互补序列上发生碱基错配，则在一定的温度条件下两个互补序列间的分子内杂交将受到阻碍而分开；因此，在一定的温度条件下，通过以三羟甲基氨基甲烷-甘氨酸pH8.8为电极缓冲液，以三羟甲基氨基甲烷-乙酸pH6.5为胶缓冲液的非变性、非连续pH聚丙烯酰胺凝胶电泳可以检出互补序列上的突变。