浊度法测定杆菌肽及其制剂含量的方法

摘要

本发明公开了一种浊度法测定杆菌肽及其制剂含量的方法，该方法含有标准品溶液的制备、供试品溶液的制备、试验菌悬液的制备、含量测定等步骤。采用本发明的抗生素微生物检定法－多剂量浊度法测定杆菌肽及其制剂的含量不但试验方法准确、有效、成本低廉，而且试验结果能真实反映出杆菌肽及其制剂的抗菌活性，该方法在该药品及其制剂的生产和质量控制中具有较强的实用性和操作性。

主权项

1、一种浊度法测定杆菌肽及其制剂含量的方法，其特征在于该方法步骤为：(1)、标准品溶液的制备：称取杆菌肽标准品2.5mg，用0.1M盐酸溶液定容至25ml，制成标准品贮备液；取上述标准品贮备液5ml，用灭菌缓冲液定容至50ml，制成标准品中间溶液；用灭菌缓冲液将标准品中间溶液稀释成杆菌肽标准品浓度在0.1ug/ml-0.8ug/ml之间的3-5组溶液，制成标准品系列剂量溶液，其中标准品系列剂量溶液的浓度中含有0.4ug/ml的溶液，其它溶液浓度分散在0.4ug/ml两边；(2)、供试品溶液的制备：称取杆菌肽样品2.5mg，用水定容至25ml量瓶中，制成样品贮备液；取上述样品贮备液5ml，用灭菌缓冲液定容至50ml，制成样品中间溶液；取样品中间溶液4.0ml，用灭菌缓冲液定容至100ml，制成供试品溶液；(3)、试验菌悬液的制备：取表皮葡萄球菌斜面培养物，在细菌培养基中培养，稀释后制成试验菌悬液；(4)、含量测定：上述标准品系列剂量溶液和供试品溶液组成4-6个浓度组，取对应组数的试验管，在各试验管内均加入试验菌悬液9.0ml，再分别加入各浓度的标准品或供试品溶液各1.0ml；在37℃培养3h-4h，用比浊法测量仪在线测定各管在530nm处的吸光度；取2支试验管，其中一支加入pH＝6.0的磷酸盐缓冲液1.0ml和抗生素微生物检定用培养基液体9.0ml，作为同条件培养的溶液的空白；另一支加入pH＝6.0的磷酸盐缓冲液1.0ml和试验菌悬液9.0ml，作为同条件培养的阳性对照；以重复以上操作，作3-5组测定；(5)、在抗生素比浊法测量仪上在线测量并计算结果即得杆菌肽及其制剂的含量。