对血液型脓病具有高抗性的转基因家蚕制作方法

摘要

本发明公开了提高对血液型脓病抗性的转基因家蚕制作方法，通过基因工程操作构建同时携带家蚕核型多角体病毒的ie－1基因的dsRNA表达盒和lef－1基因的dsRNA表达盒的、具有新霉素抗性基因Neo和荧光蛋白报告基因的、以piggyBAC转座子为基础的转基因载体，在辅助质粒作用下导入初产卵，获得的转基因家蚕对血液型脓病的抗性有显著提高。本发明通过转基因与RNAi技术的结合，实现了定向提高家蚕对血液型脓病的抗性，同时优化了转基因家蚕的筛选过程。

主权项

1.一种对血液型脓病具有高抗性的转基因家蚕制作方法，其特征在于包括如下步骤：[1]构建用家蚕组织有活性的启动子控制家蚕核型多角体病毒的ie-1基因的dsRNA表达盒和lef-1基因的dsRNA表达盒；[2]将步骤[1]获得的两种表达盒克隆进以转座子piggyBAC因子为基础的带有荧光蛋白报告基因的转基因载体，获得转基因载体pigRNAi-ie-lef；[3]用家蚕组织有活性的启动子控制新霉素抗性基因，克隆进步骤[2]转基因载体pigRNAi-ie-lef获pigRNAineo-ie-lef；[4]将转基因载体pigRNAineo-ie-lef与辅助质粒作混合，导入初产卵，孵化后的蚁蚕用G418筛选至4龄眠，结合荧光蛋白报告基因筛选，获得抗G418、带有荧光蛋白报告基因的转基因家蚕，进一步将转基因家蚕的杂交后代，接种家蚕核型多角体病毒，通过验证筛选获得对血液型脓病有抗性的转基因家蚕。