外源核酸序列的靶向整合和表达

摘要

本发明公开了将外源序列靶向整合到基因组中预定靶位点，以(例如)用于蛋白质表达和基因失活的方法和组合物。

主权项

1.一种在细胞中表达外源核酸序列产物的方法，所述方法包括：(a)在所述细胞中表达第一种融合蛋白，所述第一种融合蛋白含有第一锌指结合域和第一切割半域，其中所述第一锌指结合域经工程改造能结合于所述细胞基因组中感兴趣区域的第一靶位点；(b)在所述细胞中表达第二种融合蛋白，所述第二种融合蛋白含有第二锌指结合域和第二切割半域，其中所述第二锌指结合域结合于所述细胞基因组中感兴趣区域的第二靶位点，所述第二靶位点与所述第一靶位点不同；和(c)使所述细胞接触含有外源核酸序列和与所述感兴趣区域中第一序列同源的第一核苷酸序列的多核苷酸；其中所述第一种融合蛋白与所述第一靶位点结合和所述第二种融合蛋白与所述第二靶位点结合使所述切割半域定位，而在所述感兴趣区域切割所述细胞基因组，从而导致所述外源序列整合到所述细胞基因组的感兴趣区域中，表达所述外源序列的产物。