提高转基因昆虫细胞表达外源基因水平的方法

摘要

本发明公开了一种提高昆虫转基因细胞表达外源基因的方法，将在昆虫细胞内具有活性的启动子控制的新霉素抗性基因表达盒、增强子元件和外源基因表达盒通过基因操作克隆进以转座子piggyBAC因子为基础的带有报告基因的载体，然后与表达转座酶的辅助质粒混合转染昆虫细胞系，通过G418的分段筛选获得转基因昆虫细胞。该转基因细胞通过细胞克隆技术，结合外源基因表达水平的实际检测获得外源基因高水平表达的工程细胞。本发明方法实现了转基因昆虫细胞高水平持续表达外源基因，表达产物无杆状病毒污染，生物安全性高，后加工完善，天然性好。

主权项

1.一种提高转基因昆虫细胞表达外源基因水平的方法，包括以下具体步骤：(1)构建昆虫细胞内具有活性的启动子X控制外源基因的载体；(2)构建带有增强子元件en的基于piggyBAC转座子的带有报告基因的载体pigA3-en；(3)双酶切步骤(1)所得载体，回收启动子X控制外源基因的片段，克隆进同样双酶切的pigA3-en，得带有增强子en和启动子X控制外源基因的载体；(4)构建昆虫细胞内具有活性的启动子Y控制新霉素抗性基因neo的重组载体；(5)酶切步骤(4)所得载体，回收启动子Y控制新霉素抗性基因的片段Y-Neo，克隆进同样酶切的步骤(3)所得载体，得到带有启动子X控制外源基因表达盒、增强子元件、启动子Y控制新霉素抗性基因、荧光蛋白报告基因的重组转基因载体；(6)将步骤(5)所得重组转基因载体与表达转座酶的辅助质粒混合，转染昆虫细胞系，通过G418的分段筛选获得转基因昆虫细胞。