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Die Erfindung betrifft ein Verfahren und ein Testkit zum schnellen Nachweis spezifischer Nukleinsäuresequenzen, insbesondere zum Nachweis von Mutationen oder SNPs (SNP = single nucleotid polymorphism), wobei die Nachweisreaktion zweistufig erfolgt. In einem ersten Schritt erfolgt die targetspezifische Amplifikationsreaktion, gekoppelt mit der Sondenhybridisierungsreaktion unter Verwendung von fluoreszenzmarkierten allelspezifischen Amplifikations-Primern. Im zweiten Schritt erfolgt der Nachweis der Fluoreszenz mittels handelsüblicher Fluoreszenz-Reader. Die Genotypisierung erfolgt aus dem Quotienten der Endpunktfluoreszenz der Proben und der Negativkontrollen.
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