发明名称 |
玻璃微柱亲和层析测定肝癌特异性AFP的方法 |
摘要 |
本发明公开了一种玻璃微柱亲和层析测定肝癌特异性AFP的方法,包括制亲和层析柱装置、取血清0.2ml加洗脱液0.8ml上层析柱,收集25管液体进行A<SUB>280</SUB>吸光值及AFP浓度测定等步骤。本发明利用AFP异质体对LCA的亲和力建立了检测AFP-L3的方法。该方法的优点是层析柱可反复再生使用,所用仪器简便、重复性满意,同时批量检测样本较多,适合基层单位的临床应用。 |
申请公布号 |
CN101266251A |
申请公布日期 |
2008.09.17 |
申请号 |
CN200810025043.X |
申请日期 |
2008.04.25 |
申请人 |
南通大学附属医院 |
发明人 |
姚登福;吴玮;董志珍 |
分类号 |
G01N33/68(2006.01);G01N30/06(2006.01);G01N1/34(2006.01) |
主分类号 |
G01N33/68(2006.01) |
代理机构 |
南通市永通专利事务所 |
代理人 |
葛雷 |
主权项 |
1、一种玻璃微柱亲和层析测定肝癌特异性AFP的方法,其特征是:依次包括下列步骤:(1)制亲和层析柱装置,玻璃微柱0.7cm×15cm;(2)使用洗脱液清洗柱子的每个角落除去气泡,关闭柱子出口并且留下1~2cm的缓冲液在柱子中,将LCA-Sepharose 4B从4℃冰箱中取出平衡至室温,然后沿柱壁向层析柱中加入,用10倍于柱体积的洗脱液平衡,关闭出口;(3)取血清0.2ml加洗脱液0.8ml上层析柱,洗脱液洗脱,滴速约8~12/min,每次收集1ml,共收集15管至A280<0.02,随后以解吸液洗脱,方法同前,共收集10管,至A280<0.02,收集完毕用洗脱液清洗并平衡层析柱,用同样的方式分离第二个标本,每个标本共收集25管;(4)收集25管液体进行A280吸光值及AFP浓度测定,以标准品浓度为横坐标,结合率为纵坐标制作标准曲线,根据样品的结合率在标准曲线上查出样本的AFP浓度,解吸液收集的即为AFP-L3,AFP-L3/总AFP即为AFP-L3%;所述洗脱液:pH7.4 20mmol/L Tris-HCl,含0.5mol/L NaCl,Mg2+、Ca2+,0.1% TritonX-100;所述解吸液:含0.3mol/L α-甲基-D-甘露糖苷的洗脱液。 |
地址 |
226001江苏省南通市西寺路20号 |