发明名称 |
CRM197突变体的纯化方法 |
摘要 |
本发明涉及一种大肠杆菌表达的CRM197突变体的纯化方法,属于医药技术领域。纯化方法步骤包括如下:将包涵体变性、复性后,先利用超滤方法进行浓缩后,在利用阴离子交换层析进行纯化,收集蛋白峰,即可得到高纯度的蛋白样品。本方法具有适合规模化生产、操作简便、生产周期短、产品纯度高、工艺稳定性强等特点。 |
申请公布号 |
CN101265288A |
申请公布日期 |
2008.09.17 |
申请号 |
CN200710013378.5 |
申请日期 |
2007.03.13 |
申请人 |
齐鲁制药有限公司 |
发明人 |
王克波;孙丽霞;董婷;张薛;徐同文;王晶翼 |
分类号 |
C07K1/14(2006.01);C07K14/195(2006.01);C12N1/21(2006.01);C12N15/33(2006.01) |
主分类号 |
C07K1/14(2006.01) |
代理机构 |
济南金迪知识产权代理有限公司 |
代理人 |
王绪银 |
主权项 |
1. 一种CRM197突变体的纯化方法,包括如下步骤:(1)采用大肠杆菌以包涵体形式表达重组CRM197突变体,包涵体经过变、复性后得到含有目的蛋白组分的复性液;(2)复性液通过超滤进行分离和浓缩,并用Tris-HCl缓冲液进行换液,将复性液浓缩5-25倍,得超滤浓缩液;(3)上述超滤浓缩液通过阴离子交换层析进行纯化层析,截留核酸和大部分杂蛋白质,得到含有目的蛋白CRM197突变体的分级组分;(4)用平衡缓冲液对阴离子交换层析系统进行平衡,使目的蛋白吸附到阴离子层析柱上,大部分杂质穿出阴离子层析柱;(5)用添加了NaCl的平衡缓冲溶液对上述步骤(4)处理后的阴离子交换层析柱进行洗脱,使目的蛋白穿出阴离子交换层析柱,收集洗脱蛋白液,即得目的蛋白液。 |
地址 |
250100山东省济南市历城区工业北路243号 |