设计具有预定特性的α－淀粉酶突变体的方法

摘要

一种构建亲代类Termamylα-淀粉酶的变体的方法，该变体具有α-淀粉酶活性，而且与亲代类Termamylα-淀粉酶相比至少有一种改变了的特性，所述方法包括i)分析所述亲代类Termamylα-淀粉酶结构，以确定该类Termamylα-淀粉酶结构的至少一个氨基酸残基或至少一个结构部分，据信该氨基酸残基或结构部分与改变所述亲代类Termamylα-淀粉酶的特性相关(根据结构或功能因素进行评价)，ii)构建一种类Termamylα-淀粉酶变体，与亲代类Termamylα-淀粉酶相比，该变体上在i)中所确定的氨基酸残基或结构部分已被修饰过，以改变所述特性，和ii)检验所得到的类Termamylα-淀粉酶变体的所述特性。

主权项

1. 一种构建亲本α-淀粉酶的变体的方法，所述变体相对于亲本其酶活性或稳定性具有降低的Ca依赖性，其中所述亲本α-淀粉酶具有序列SEQ ID NO：2，所述方法包括：(a)根据附录中所描述的三维结构对所述亲本α-淀粉酶进行建模，以产生所述亲本α-淀粉酶的三维结构；(b)确定步骤(a)中获得的结构中距Ca2+结合位点10A°内的一个或多个靶氨基酸残基，其中所述的氨基酸残基相应于选自下列的位置：V102、I103、N104、H105、K106、R125、W155、W157、Y158、H159、F160、D161、G162、T163、Y175、K176、F177、G178、K180、A181、W182、D183、W184、E185、V186、S187、N192、Y193、D194、Y195、L196、M197、Y198、A199、D200、I201、D202、Y203、D204、H205、P206、V208、A209、D231、A232、V233、K234、H235、I236、K237、F238、F240、L241、A294、A295、S296、T297、Q298、G299、G300、G301、Y302、D303、M304、R305、K306、L307、W342、F343、L346、Q393、Y394、Y396、H405、H406、D407、I408、V409、R413、E414、G415、D416、S417、V419、A420、N421、S422、G423、L424、I428、T429、D430、G431、P432、V440、G441、R442、Q443、N444、A445、G446、E447、T448、W449、I462、G475、Y480、V481、Q482和R483；(c)修饰编码所述亲本α-淀粉酶的核酸序列以产生一种核酸，该核酸在相应于所述一个或多个靶残基的位置上编码一个或多个氨基酸的删除、插入或取代；和(d)在宿主细胞中表达所述修饰的核酸，以产生变体α-淀粉酶，其中所述变体相对于亲本α-淀粉酶其酶活性或稳定性具有降低的钙离子依赖性。