一种快速建立DSE与植物共生培养体系的方法及其应用

摘要

本发明涉及一种快速建立DSE与植物共生培养体系的方法及其应用，具体为快速建立深色有隔内生真菌与植物共生培养体系的方法及其应用，属于应用微生物学、植物营养和生态学领域。本发明基于DSE碳源利用广且为好氧微生物这一生物学特性，选择透气性好的河沙为固体基质，添加经改进的MS培养基为营养液，满足了DSE－植物共生体系建立早期的营养生长需求。本发明以植物幼苗、DSE为材料。通过在无菌培养基上接种DSE和植物幼苗，使其建立共生关系。本发明的方法具有DSE与植物共生培养体系建立时间短、效率高等优点，可用于DSE与植物的相互关系研究、DSE形态学方面的研究，疑似DSE菌株初步检测以及DSE接种的应用。

主权项

1、一种快速建立DSE与植物共生培养体系的方法，以植物幼苗、DSE为材料，通过在无菌培养基上接种DSE和植物幼苗，使其建立共生关系，其特征在于本发明方法的具体步骤如下：(1).DSE的活化、培养：将冷冻保藏的试管斜面上的DSE菌株活化后，接种到PDA培养基的平皿中，于28℃恒温培养2周，用打孔器沿菌落边缘打菌片若干；(2).植物无菌苗的培养：植物种子用75％乙醇和10％次氯酸钠表面消毒，消毒时间视种子大小而定，消毒后的植物种子用无菌水漂洗3次，接种到蔗糖15g/L，琼脂8g/L的蔗糖琼脂培养基平皿中，在25℃温度下恒温培养，待种子萌发形成幼苗时，挑选无污染生长一致的幼苗备用；(3).DSE和植物共体系的建立：a.共生培养基的制备：DSE和植物二者共生培养基质为改进的MS培养基和河沙，河沙经20目和140目筛子湿筛，收集140目筛面的河沙颗粒烘干待用；改进的MS培养基为MS培养基的无机成分加20g/L蔗糖；河沙与改进的MS培养基按w/w10∶3混合，放入玻璃器皿灭菌后备用；b.植物幼苗和DSE的接种：DSE和植物幼苗同时接入共生培养基，每个玻璃器皿中接入幼苗2棵，DSE接种量为每棵植物幼苗2个Φ2mm圆形菌片，接种时把菌片打碎与培养基混匀，用培养基把幼苗根部埋好，再用无菌的玻璃纸或PVA膜或PTFE膜封口；(4).共生体系的建立：接种后，在温度15-25℃，光照10小时，光照强度1000-8000Lux的条件下培养20天；(5).共生培养体系的检测：20天后，将植物从玻璃器皿中取出，用水洗净根部，放入试管，添加10％KOH 5ml，于90℃水浴锅中解离2小时，经酸性品红染色、脱色、制片过程后，于OLYPUS-BX51显微镜下镜检观察DSE的定殖情况，当部分根段看到DSE的典型特征结构--微菌核时，表明DSE-植物共生体系建立。