用混合双链寡核苷酸在植物中实现定点遗传改变的用途

摘要

本发明涉及用大约25-30个碱基对的双链寡核苷酸在植物细胞中导入位点专一性遗传改变的用途。所述寡核苷酸可以通过机械(biolistic)系统输送或通过对植物原生质体进行电穿孔输送。然后，可以从所述改变过的细胞产生具有所述遗传改变的植物。在具体实施方案中，本发明涉及编码酸性转化酶、UDP-葡萄糖焦磷酸化酶、多酚氧化酶、O-甲基转移酶、肉桂醇脱氢酶、ACC含酶和ACC氧化酶或etr-1或etr-1的同系物的基因的改变，以及在所述基因上具有分离的点突变的植物。

主权项

1. 一种在植物细胞靶基因上产生定点突变的方法，包括以下步骤：a.将一种基因修复寡核苷酸附着在一种颗粒上，该寡核苷酸包括一个第一同源区，该同源区具有一个与靶基因的第一个片段的至少6个碱基对的序列相同的序列，和第二同源区，该同源区具有与所述靶基因的第二片段的至少6个碱基对的序列相同的序列，以及一个插入区，该区至少含有一个与所述靶基因不同源的核碱基，该插入区连接所述第一同源区和第二同源区；b.将所述颗粒导入一群植物细胞的细胞中；c.从所述细胞群中鉴定在所述靶基因的第一和第二片段之间具有一个突变的细胞，其中，所述附着步骤是在含有8-10μg/μl微载体、14-17μg/mlMDON、1.1-1.4M氯化钙和18-22mM亚精胺的溶液中进行的。