分离金针菇免疫调节蛋白飞益幅（ＦＩＰ-ｆｖｅ）之方法

摘要

飞益福(FIP-fve，台湾专利号340848)是纯化自金针菇的免疫调节蛋白。口服飞益福(FIP-fve)具有抑制小鼠肝肿瘤生长和延长小鼠存活时间的效果(台湾专利申请案号092136094)。此发明之目的为建立以简单、低成本之技术纯化高纯度飞益福(FIP-fve)的方法。先将金针菇子实体浸于萃取液八小时，再以均质机破碎子实体后，过滤除去沉淀物，上清液以10％硫酸铵沉淀蛋白质后，将沉淀物以漏斗型过滤器过滤，再收集过滤板上的滤出物，装入透析膜中以缓冲液透析。将滤液再加入硫酸铵至20％浓度，滤出物之收集方法如同前述，后续步骤类此分别制备出0~10％、10~20％、20~30％...80~90％不同硫酸铵浓度之蛋白质沉淀，再以电泳方法分析各收集物所含之蛋白成分，发现以50~90％硫酸铵沉淀可纯化得高纯度的飞益福(FIP-fve)，且可省略传统纯化方法的离心及离子交换层析步骤。此外，直接以50~90％硫酸铵条件纯化之飞益福同时具有活化免疫细胞之活性，可活化小鼠脾细胞，提高其细胞增生效应及干扰素IFN-γ产生量。与传统方法相较，此法利用50％饱和之硫酸铵浓度沈淀可去除另一蛋白，同时得到高纯度之飞益福，且可藉由离心法分离沈淀物并省略传统纯化方法的离心及离子交换层析步骤。此法可用于快速大量纯化飞益福，应用于生产含飞益福之食品组合物及医药组合物。