发明名称 |
一种制备重组耐热β-葡萄糖醛酸酶的方法 |
摘要 |
一种制备重组极耐热性β-葡萄糖醛酸酶的方法,其制法是:将耐热β-葡萄糖醛酸酶基因插入表达载体pHsh,转化大肠杆菌获得耐热β-葡萄糖醛酸酶表达质粒;其次是对基因进行诱变,改变mRNA的二级结构,得到优化的耐热β-葡萄糖醛酸酶表达质粒;然后将耐热β-葡萄糖醛酸酶表达质粒或优化的耐热β-葡萄糖醛酸酶表达质粒转化大肠杆菌,得到基因工程菌,并通过热激诱导,使β-葡萄糖醛酸酶得到超量表达;最后收集细胞,破壁,离心后得到粗酶液,进一步纯化后得到纯酶。本发明首次使用表达载体pHsh对耐热β-葡萄糖醛酸酶的基因进行高效表达,并首次将重组的耐热β-葡萄糖醛酸酶应用于甘草次酸的制备。 |
申请公布号 |
CN101250539A |
申请公布日期 |
2008.08.27 |
申请号 |
CN200810018772.2 |
申请日期 |
2008.01.23 |
申请人 |
南京师范大学 |
发明人 |
邵蔚蓝;裴建军;王卓 |
分类号 |
C12N15/52(2006.01);C12N15/70(2006.01);C12N9/00(2006.01);C12P7/42(2006.01) |
主分类号 |
C12N15/52(2006.01) |
代理机构 |
南京知识律师事务所 |
代理人 |
卢亚丽 |
主权项 |
1. 一种制备重组耐热β-葡萄糖醛酸酶的方法,其特征在于,用表达载体pHsh表达耐热β-葡萄糖醛酸酶基因或其突变体,得到重组耐热β-葡萄糖醛酸酶;具体方法步骤如下:(1)将耐热β-葡萄糖醛酸酶基因插入基因表达载体pHsh,构建成耐热β-葡萄糖醛酸酶表达质粒;(2)对耐热β-葡萄糖醛酸酶表达质粒中的mRNA翻译起始区潜在的二级结构进行在线分析,并通过基因诱变打破mRNA的茎环结构、降低自由能,得到优化的重组质粒;(3)用耐热β-葡萄糖醛酸酶表达质粒或优化的耐热β-葡萄糖醛酸酶表达质粒转化大肠杆菌获得基因工程菌,并在基因工程菌的生长过程中进行热激诱导,使耐热β-葡萄糖醛酸酶得到超量表达;(4)收集细胞,破壁并离心获得粗酶液;(5)对上述粗酶液中的重组酶进行纯化得到纯化的重组耐热β-葡萄糖醛酸酶。 |
地址 |
210097江苏省南京市宁海路122号 |