从土壤中提取微生物基因组DNA的试剂盒及方法

摘要

本发明涉及一种从土壤中提取微生物基因组DNA的试剂盒和提取方法，试剂盒包括：试剂A(浸洗液)、试剂B(预处理液)、试剂C(裂解液)、试剂D：为RNA酶A、试剂E Al₂(SO₄)₃、试剂F十六烷基三甲胺、试剂G(DNA联接液)、试剂H(DNA洗涤液)、试剂K(DNA洗脱液)；提取方法包括：样品浸洗、样品预处理：微生物裂解：腐殖质去除：DNA联接：蛋白杂质去除：DNA吸附：DNA洗涤：DNA洗脱；优点是提取方法迅速，可以在3小时内完成、DNA损失少、提取过程不使用酚、氯仿，减少了对实验人员的身体健康伤害、所获DNA完整，分子片段大于10kb，产量高，包含的微生物物种信息全面、操作简单，不要求特殊仪器，成本低。

主权项

1. 一种从土壤中提取微生物基因组DNA的试剂盒，其试剂包括：(1)试剂A：含50-300mM三羟基甲基氨基甲烷、15-100mM乙二胺四乙酸，100-300mM NaCl，2-10mM柠檬酸钠，10-50mM CaCl2，0.5％吐温-80，0.2-0.5％甘油；pH为8.5；(2)试剂B：含60-80％乙醇；(3)试剂C：含50-200mM三羟基甲基氨基甲烷，50-200mM乙二胺四乙酸，4-8％十二烷基苯磺酸钠；pH为8.0-8.5；(4)试剂D：为RNA酶A，含量为5-30mg/ml；(5)试剂E：为50-150mM Al2(SO4)3；(6)试剂F：为150-400g/L十六烷基三甲胺；(7)试剂G：含6-10M GuSCN，100-300mM三羟基甲基氨基甲烷；pH为5-6；(8)试剂H：10-100mM pH 8.0三羟基甲基氨基甲烷，与无水乙醇1∶2-1∶4V/V混合；(9)试剂K：5-15mM pH 8.0三羟基甲基氨基甲烷或ddH2O。