一种制备骨形态发生蛋白BMP－2成熟肽的方法

摘要

本发明提供了一种制备重组骨形态发生蛋白BMP－2成熟肽的方法：删除DsbA基因信号肽第2～18个氨基酸编码基因，保留第一个甲硫氨酸的密码子作为起始密码子，得到片段重组于表达载体中，获得的重组质粒1；将骨形态发生蛋白BMP－2完整成熟肽的DNA重组于重组质粒1中DsbA基因的下游，获得重组质粒2；将重组质粒2转化入表达宿主菌株的菌体中，得到工程菌经培养、添加诱导剂使目的基因表达，破菌、分离纯化得到DsbA－BMP－2融合蛋白，蛋白酶酶切DsbA－BMP－2融合蛋白，经分离得到所述的骨形态发生蛋白BMP－2成熟肽。本发明方法制得的产物可与天然BMP－2成熟肽氨基酸序列完全一致，实现可溶性胞内融合表达，融合蛋白可以用Ni²⁺亲和层析一步纯化，进一步简化了BMP－2复性前的纯化步骤。

主权项

1. 一种骨形态发生蛋白BMP-2成熟肽的制备方法，其特征在于所述方法包括如下顺序步骤：(1)删除DsbA基因信号肽第2～18个氨基酸编码基因，保留第一个甲硫氨酸的密码子作为起始密码子，得到编码不含信号肽的DsbA的DNA片段，将该片段重组于表达载体中，获得重组质粒1；(2)将编码骨形态发生蛋白BMP-2完整成熟肽的DNA重组于重组质粒1中DsbA基因的下游，获得重组质粒2；(3)将重组质粒2转化入宿主菌株的菌体中，得到工程菌，所述宿主菌为无硫氧还蛋白还原酶缺陷的大肠杆菌宿主的DE3溶原菌；(4)工程菌在含有抗生素的培养基中培养，添加诱导剂使目的基因表达；(5)工程菌细胞经破菌，分离纯化得到BMP-2融合蛋白；(6)蛋白酶酶切BMP-2融合蛋白，经分离得到所述的骨形态发生蛋白BMP-2成熟肽。