DNA construct, isolated molecule of nucleic acid, homologous recombinant cell and its use, method of changing expression of endogenous G-CSF gene and production process of G-CSF

摘要

Je popsán DNA konstrukt, který pozmenuje po zaclenení do genomu savcí bunky prostrednictvím homologní rekombinace expresi endogenního G-CSF genu v bunce, a obsahuje: (i) urcující sekvenci, obsahujícíalespon 20 bezprostredne po sobe následujících nukleotidu ze SEQ ID císlo 5 a (ii) transkripcní regulacní sekvenci. Izolovaná molekula nukleové kyseliny obsahuje alespon 100 bezprostredne po sobe následujících nukleotidu ze SEQ ID císlo 5 nebo její komplement, pricemž izolovaná nukleová kyselina nekóduje celý G-CSF; dále je popsána homologne rekombinantní bunka stabilne transfektovaná DNA konstruktem, pricemž DNA konstrukt podstoupil homologní rekombinaci s genomickou DNA upstream k iniciacnímukodónu ATG sekvence, kódující endogenní G-CSF, a rovnež zpusob produkce G-CSF, podle kterého se shora uvedená homologne rekombinantní bunka kultivujein vitro za takových podmínek, které umožnují bunce exprimovat a vylucovat G-CSF.