基因工程制备人白细胞介素24的方法及其表达载体和工程菌

摘要

本发明提供一种高效地制备具有一定生物活性的基因工程人白介素24的方法，及其表达载体和工程菌。本发明选用融合表达载体来表达hIL-24或hsIL-24蛋白，所述的表达载体为含有人白细胞介素24基因序列(IL-24)或人白细胞介素24基因突变序列(sIL-24)的质粒载体pET32a(+)，且hIL-24或hsIL-24编码序列位于pET32a(+)载体上Kpn1和BamH1酶切位点之间。所述的基因工程菌是大肠杆菌，并被本发明所述的表达载体所转化，是pET32a(+)-hIL-24/BL21或pET32a(+)-hsIL-24/BL21。本发明的制备工艺中提供了全套的溶解、复性、消化以及纯化的工艺，使目的蛋白的表达量能够达到30％，复性得率大于50％，IL-24的纯度大于95％，且完全适用于工业大规模生产。

主权项

1. 一种基因工程人白细胞介素24的表达载体，其特征在于，该载体为含有人白细胞介素24基因序列hIL-24或人白细胞介素24基因突变序列hsIL-24的质粒载体pET32a(+)，且hIL-24或hsIL-24编码序列位于pET32a(+)载体上Kpn1和BamH1酶切位点之间，该载体为pET32a(+)-hIL-24或pET32a(+)-hsIL-24；克隆hIL-24或hsIL-24基因的引物为：P1 5’-GGTACCGACGACGACGACAAGGCCCAGGGCCAAGAATT Kpn1P2 5’-GGATCCTTACAGAGCTTGTAGAATTTCTG BamH I为避免在N端引入Ala和Met两个多余的氨基酸，在设计引物时将肠激酶识别位点的编码碱基，即GACGACGACGACAAG，加入到上游引物中；其中，hsIL-24的序列见序列表2。