紫芝溶栓酶的制备方法及其应用

摘要

紫芝溶栓酶的制备方法包括紫芝的固态发酵过程：①菌种活化，将紫芝菌丝体均匀涂布在斜面培养基表面培养；②种子培养，以黄豆为种子培养基，将步骤①获得的活化菌种接种至种子培养基摇瓶培养；③将黄豆制成固体发酵培养基；④发酵产酶，将步骤②获得的种子菌液接种至步骤③获得的固体发酵培养基中发酵培养获得固体发酵物料；酶的分离纯化过程：i粗酶制剂制备，取前述固态发酵过程中获得的固体发酵物料加入磷酸钠缓冲液匀浆，搅拌制备、离心，取上清液为粗酶液；ii酶的纯化，将步骤i获得的粗酶液进行Sephadex G－50柱层析，收集有酶活性的洗脱液部分，进行CMC离子交换柱层析，收集酶活性峰的洗脱液部分，获得纯化的紫芝溶栓酶。

主权项

1、紫芝溶栓酶的制备方法，其特征在于包括以下步骤：紫芝的固态发酵过程和酶的分离纯化过程，其中紫芝的固态发酵过程包括：①菌种活化，将紫芝菌丝体均匀涂布在斜面培养基表面培养；②种子培养，将黄豆匀浆加水煮沸，制成种子培养基，将步骤①获得的活化菌种接种至种子培养基摇瓶培养；③将黄豆制成固体发酵培养基；④发酵产酶，将步骤②获得的种子菌液接种至步骤③获得的固体发酵培养基中发酵培养获得固体发酵物料；酶的分离纯化过程包括：i粗酶制剂制备，取前述紫芝固态发酵过程中获得的固体发酵物料加入磷酸钠缓冲液匀浆，搅拌制备、离心，取上清液为粗酶液；ii酶的纯化，将步骤i获得的粗酶液进行Sephadex G-50柱层析和CMC离子交换柱层析，用离子强度pH线性梯度洗脱，收集具酶活性的洗脱液部分，获得纯化的紫芝溶栓酶。