LKB1基因Thr336磷酸化多克隆抗体制备方法及在肿瘤发生中检测的应用

摘要

本发明公开了一种LKB1基因Thr336磷酸化多克隆抗体制备方法及在肿瘤发生中检测的应用，其抗体制备是通过生物信息学方法选取LKB1基因的Thr336位点附近10个氨基酸WRSMT_pVVPYL，且使Thr336位点磷酸化，并铰链上BSA，以此为Thr336－p－LKB1抗原，对兔子进行免疫获得Thr336－p－LKB1抗血清；用Thr336－p－LKB1抗原条进行抗血清纯化；Thr336－p－LKB1抗体阴性对照的底物为融合表达蛋白His－LKB1，阳性对照的底物为Thr336－p－LKB1抗原肽段，商品非磷酸化LKB1抗体不仅识别His－LKB1蛋白而且识别p－LKB1(Thr336)肽段，而本发明的p－LKB1(Thr336)抗体仅识别p－LKB1(Thr336)抗原。为LKB1蛋白功能研究和肿瘤诊断提供有力工具。

主权项

1、LKB1基因Thr336磷酸化多克隆抗体制备方法，其特征在于包括以下步骤：(1)、通过生物信息学方法选取LKB1基因的Thr336位点附近10个氨基酸WRSMTpVVPYL，且使Thr336位点磷酸化，并铰链上BSA以增强其抗原性，以此为Thr336-p-LKB1抗原，对兔子进行免疫获得Thr336-p-LKB1抗血清；(2)、用Thr336-p-LKB1抗原条进行抗血清纯化：(3)、制备的抗血清通过Western blot检测抗体效价及特异性检测，Thr336-p-LKB1抗体阴性对照的底物为融合表达蛋白His-LKB1，阳性对照的底物为Thr336-p-LKB1抗原肽段。