单条植物线虫核糖体内部转录间隔区序列套式PCR扩增方法

摘要

本发明涉及套式PCR技术扩增单条植物寄生线虫核糖体rDNA转录间隔区(Internal Transcribed Spacer，ITS)的核酸序列，属于植物寄生线虫检测领域。本发明筛选了3条引物，建立了套式PCR扩增技术，包括2套不同的PCR扩增体系和2套不同的PCR扩增程序，免去了引物大量合成的成本和管理保存的麻烦。本发明的有益效果是：所涉及的技术成熟、操作简单，所用引物少，目前只有3条就基本解决问题，与实时荧光PCR技术相比，该技术成本低，操作简单，可重复性强，假阳性结果出现概率低，可用于单条植物寄生线虫幼虫或通过常规PCR无法扩增的单条植物寄生线虫ITS核酸序列的扩增。非常适合于口岸日常检疫鉴定使用。

主权项

1.单条植物线虫核糖体内部转录间隔区序列套式PCR扩增方法，其特征是，它包括以下步骤：(1)单条植物寄生线虫DNA的提取技术；(2)所用引物的筛选，序列如下：P1：5’-CGTAACAAGGTAGCTGTAG-3’P2：5’-TTTCACTCGCCGTTACTAAGG-3’P3：5’-GATTACGTCCCTGCCCTTTGT-3’(3)套式PCR扩增第一步的扩增体系和扩增程序；(4)套式PCR扩增第二步的扩增体系和扩增程序。