一种全血DNA的提取方法

摘要

本发明公开了一种全血DNA的提取方法，解决了目前提取全血DNA时提取率不高的缺点，本发明的步骤为：将血置于离心管中，加入含有蛋白酶K的缓冲液进行酶切，离心，加入酚，再离心，然后用酚－氯仿混合物提取2～3次，即得DNA；本发明所用的蛋白酶K的缓冲液为含有20mmol/L Tris.Cl(pH8.0)、200mmol/L EDTA(pH8.0)、1％SDS、240ug/ml蛋白酶K的水溶液。本发明具有简单、有效、提取率高等优点。

主权项

1.一种全血DNA的提取方法，其特征在于：包括以下步骤：(1).取冻融处理的ACD抗凝血，置于离心试管中，加入含有240ug/ml蛋白酶K的缓冲液，振荡混匀，置于50℃水浴20～28小时，水浴过程中缓慢摇动离心管；(2).酶切完成后，向离心管中加入等体积的pH为8.0的重蒸饱和酚，盖紧管盖，反复颠倒或用DNA混合仪转动混匀，直至两相混合均匀；(3).把离心管置于13000rpm下离心5分钟，轻轻移动试管，用移液器将上清液体移至另一个尖底离心管中；(4).重复步骤(2)(3)；(5).向上述离心管中加入酚，再加入与酚等体积的氯仿或直接加入事先混好的1∶1的酚-氯仿混合物，盖紧管盖，反复颠倒或用DNA混合仪转动混匀，至两相混合均匀；(6).用移液器将上清液移至另一个尖底试管中；(7).向上述溶液中加入氯仿，盖紧管盖，反复颠倒或用DNA混合仪转动混匀，至两相混合均匀；(8).将上清液转移至尖底试管中，加入-20℃的无水乙醇，颠倒混匀；(9).把离心管置入高速离心机，以13000rpm离心8分钟，打开试管盖，将试管口朝下，轻轻地倒掉上清液；(10).加入70％乙醇，清洗一次，把离心管放入高速离心机以13000rpm离心8分钟，打开试管盖，反转试管口朝下，轻轻倒掉上清液；(11).将尖底管倒扣于吸水纸上，吸干残留液体后平卧，室温晾干；(12).晾干后加入双蒸水，37℃保温或常温下过夜，使DNA溶解；(13).将溶解后的DNA进行浓度测定，然后置于-20℃冰冻保存。