非洲菊离体高频再生繁殖方法

摘要

一种非洲菊离体高频再生繁殖方法，本发明以非洲菊试管苗叶柄作为高频离体再生的材料，经过花托初代培养，愈伤组织诱导、不定芽分化和继代增殖，生根培养和试管苗移栽等培养步骤，在培养繁殖的各阶段调配优选的培养基，包括：花托初代培养基，愈伤组织诱导初代诱导培养基，愈伤组织诱导培养基，愈伤组织增殖和分化培养基，生根培养基和移栽培养基，提供合适的温度和光照控制条件，使非洲菊能基于叶柄进行离体高濒快速繁殖而进行种苗生产，并能应用于非洲菊的遗传转化，满足非洲菊种苗市场和进行遗传工程育种的需要。

主权项

1.非洲菊离体高频再生繁殖方法，其特征在于包括下述培养步骤：(1)花托初代培养：在生长季节选取生长健壮的非洲菊的幼嫩花托为外植体，先在70％-75％酒精中浸泡10-30秒，再用0.1％升汞溶液消毒5-10分钟，无菌水冲洗4～5次，接种到花托初代培养基中，培养温度26～30℃，光照度1500～2000lx，光照8～12h/天，培养50-70天至形成完整小植株；所述的花托初代培养基每升中含有6-苄基嘌呤5.0～10.0mg，萘乙酸0.5～1.0mg，蔗糖20～30g和琼脂5～7g，其余为MS，pH5.5～5.8；(2)愈伤组织诱导、不定芽分化和继代增殖：取上述花托初代培养育成的小植株的叶片的叶柄接种到愈伤初代诱导培养基，培养13-17天，所述的愈伤初代诱导培养基每升中含有1-苯基-3-(1，2，3-噻二唑-5-基)脲0.2-1.0mg，萘乙酸0.05-0.2mg，蔗糖20～30g，琼脂5～7g，其余为MS，pH5.5～5.8；再转到愈伤组织诱导培养基上培养至产生愈伤组织，所述的愈伤组织诱导培养基每升中含有6-苄基嘌呤1.0-3.0mg，萘乙酸0.05-0.2mg，蔗糖20～30g，琼脂5～7g，其余为MS，pH5.5～5.8；再将所产生的愈伤组织转移到愈伤组织增殖和分化培养基中培养，使愈伤组织的增殖和分化不定芽，所述的愈伤组织增殖和分化培养基每升中含有6-苄基嘌呤0.5-2.0mg，萘乙酸0.2-1.0mg，蔗糖20～30g，琼脂5～7g，其余为MS，pH 5.5～5.8；上述各阶段的培养条件均为：培养温度26～30℃，光照度1500～2000lx，光照8～12h/天；(3)生根培养和试管苗移栽：将上述所产生的不定芽转移到生根培养基上培养20～30天至每株苗生根4～8条，所述的生根培养基每升中含有吲哚丁酸0.5-0.8mg，蔗糖20～30g，琼脂5～7g，其余为MS，pH5.5～5.8；再使生根苗在自然光照下炼苗7-10天后，移栽到泥炭和蛭石按重量1∶1混配的混合基质中。