地锦体细胞胚发生途径的植株再生方法以及用于该方法的培养基

摘要

本发明涉及植物组织与细胞培养技术领域，具体地说，本发明涉及地锦体细胞胚发生途径的植株再生方法。该方法包括下列步骤：a)在含有诱导剂的培养基上培养地锦外植体，该外植体为地锦的叶柄，从该外植体中诱导出愈伤组织；b)挑选步骤a)得到的发育状态良好的愈伤组织接种到增殖培养基上使其增殖；c)挑选步骤b)得到的发育状态良好的愈伤组织接种到体胚诱导培养基上诱导体胚分化或产生脆性胚性愈伤组织，胚性愈伤组织接种于胚性愈伤组织继代培养上长期继代，或接种于体胚培养上分化；d)将步骤c)中的未成熟体胚接种到体胚增殖培养基上增殖并促进其进一步分化；e)将步骤d)得到的成熟体胚接种到体胚成苗培养基上使其再生出完整植株。该方法所采用的外植体来源广泛，方便易得，所得的脆性胚性愈伤组织为农杆菌介导的地锦遗传转化提供了良好的受体。本发明还涉及用于该方法的一些培养基。

主权项

1.一种将地锦植物再生为完整植株的方法，它包括下列步骤：a)在含有诱导剂的培养基上培养地锦外植体，该外植体为地锦的叶柄，从该外植体中诱导出愈伤组织；b)挑选步骤a)得到的发育状态良好的愈伤组织接种到愈伤组织增殖培养基上使其增殖；c)挑选步骤b)得到的发育状态良好的愈伤组织接种到体胚诱导培养基上诱导体胚分化；d)将步骤c)中的未成熟体胚接种到体胚增殖培养基上增殖并促进其进一步分化，得到成熟体胚；e)将步骤d)得到的正常体胚接种到用于正常体胚的体胚成苗培养基上使其再生出完整植株，或者将其中的畸形胚接种到用于畸形胚的体胚成苗培养基上先诱导成无根的小苗，再将无根苗转移到生根培养基上诱导生根；所述的培养基组分如下：愈伤组织诱导培养基：B5+2，4-D 1.0mg/L+CH 500mg/L+AC 0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L，pH 6.0；愈伤组织增殖培养基：B5+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.1mg/L+CH 500mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L，pH 6.0；愈伤组织继代培养基：MS+6-BA 0.1mg/L+NAA 0.3mg/L+CH 500mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L，pH 6.0；体胚诱导培养基：MS+6-BA 1.5mg/L+NAA 0.05mg/L+CH 500mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L，pH 6.0；体胚增殖培养基：MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.05mg/L+CH 500mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L，pH 6.0；正常体胚成苗培养基：MS+蔗糖30g/L+琼脂7g/L，pH 6.0；畸形体胚成苗培养基：MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.01mg/L+CH 500mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L，pH 6.0；生根培养基：1/2MS+IBA 0.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L，pH 6.0。