多重寡核苷酸添加和目标扩增

摘要

描述了直接向核酸模板特别是向单链模板内部的限定位点添加寡核苷酸的方法。向不同序列的多个模板中的每一个添加第一个和第二个公共的引发位点使得随后能够对不同序列的多个模板进行化学计量的扩增。

主权项

1.一种将至少第一寡核苷酸直接添加到核酸模板上的方法，该方法包含：同时使模板和至少第一寡核苷酸与至少第一个探针进行退火，其中该探针包括至少第一个模板互补性区域和至少第一个直接与其邻近的寡核苷酸定位区域，该探针中模板互补性区域的核苷酸和直接邻近的寡核苷酸定位区域的核苷酸成为第一连接核苷酸，其限定其间第一个探针连接，和其中该寡核苷酸包括与该探针的第一个寡核苷酸定位区域互补的末端区域，该末端寡核苷酸区域的末端核苷酸与该探针第一个寡核苷酸定位区域的连接核苷酸退火；在与探针第一个模板互补性区域的连接核苷酸退火的模板核苷酸处生成第一个可连接的游离末端；然后将该第一寡核苷酸与该模板的第一个游离末端连接。