家蚕滞育品种的早期浸酸转基因方法

摘要

一种家蚕滞育品种的早期浸酸转基因方法，利用在蚕卵胚胎发育至胚带形成之前的一定时间内，即产卵后2个半小时之前对家蚕滞育卵进行盐酸的浸泡处理，随后对处理解除滞育的蚕卵进行胚胎显微注射，催青孵化获得的G0代家蚕的饲养至化蛾，它们的自交或回交产生G1代，通过荧光标记筛选，从而有效制作转基因家蚕。该方法直接采用生产中普遍使用的实用性家蚕滞育品种作为原始材料，可以避免漫长而烦琐的育种过程，直接利用转基因技术创造出各种性状优良的新的特殊家蚕品种，可大大缩短育种的周期，节约大量的人力和物力。

主权项

1.一种家蚕滞育品种的早期浸酸转基因方法，其特征在于依次通过以下步骤实现：(1)家蚕滞育品种进行常规饲养；(2)在25℃的种茧保护温度下收集同时化蛾的雌雄蚕蛾，在25℃、弱光的条件下交配4h后拆对，并将雌蛾投放于上浆的蚕连纸上，在黑暗的环境中产卵，每间隔1h收集一次蚕卵，并将收集的蚕卵置于25℃的环境中保护备用；(3)以蚕卵收集时间为起点开始记时，于收集后2h15min-2h30min，将上述收集的蚕卵连同蚕连纸片一并浸入46℃恒温、比重1.075的HCl中处理1min30s-3min30s，及时取出在流水中漂洗至酸脱尽，解除滞育蚕品种的滞育；(4)将脱尽酸的蚕卵用镊子转移至用75％酒精消毒的载玻片上，并按照蚕卵腹面向右的标准将其排列整齐，排列好的蚕卵置于35-37％的甲醛蒸气中消毒5min；(5)以收集的时间开始记时，于收集后3h-6h用显微注射仪将10-15nl、总浓度400ng/ul的piggyBac质粒转座载体从蚕卵腹面中央注入已经消毒的蚕卵中，并用无毒的胶水封闭卵壳注射留下的小孔；(6)将注射完成的蚕卵在35-37％的甲醛蒸气中消毒5min后置于25℃、相对湿度85％以上的湿度条件下，进行催青直到孵化，饲养孵化出来的蚁蚕，将当代(G0)的蚕蛾进行自交或回交，获得G1代蚕卵，扫描G1代蚕卵获得转基因个体；最后，获得的转基因个体饲养、传代，即完成家蚕滞育品种的转基因蚕的制作。h表示小时，min表示分钟。