发明名称 从鲜鹿茸中提取胰岛素样生长因子-1的方法
摘要 本发明公开了一种从鲜鹿茸中提取胰岛素样生长因子-1(IGF-1)的方法,属于从鹿茸中提取活性成分的技术。利用pH9~12的碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液、碳酸氢钠-氢氧化钠缓冲液或稀氨水与稀酸配制而成的碱性溶液为提取剂,通过超声波强化浸提、超滤浓缩、去脂、酸解、离子交换层析、第二次超滤和冷冻干燥等步骤提取鲜鹿茸中的IGF-1等活性多肽。采用本发明技术,IGF-1的提取率可以达到3200~3500ng IGF-1/g鲜鹿茸;而采用去离子水作提取剂,在相同工艺条件下IGF-1的提取率仅为1000ng IGF-1/g鲜鹿茸以下。制得的产品可应用于医药、保健品等诸多方面。
申请公布号 CN100390199C 申请公布日期 2008.05.28
申请号 CN200510015619.0 申请日期 2005.10.25
申请人 天津大学 发明人 王金宇;李淑芬
分类号 C07K14/65(2006.01);C07K1/14(2006.01) 主分类号 C07K14/65(2006.01)
代理机构 天津市杰盈专利代理有限公司 代理人 赵敬
主权项 1.一种从鲜鹿茸中提取胰岛素样生长因子-1的方法,其特征在于包括以下步骤:(1)超声波强化浸提:将鲜鹿茸在4~10℃条件下粉碎,然后按质量比加入3~10倍的pH9~12的碱性溶液作提取剂,所述的碱性溶液为碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液,或为碳酸氢钠-氢氧化钠缓冲液,或为稀氨水与1mol/L硫酸配制而成的溶液,或为稀氨水与2mol/L盐酸配制而成的溶液,提取温度为20~30℃,超声功率为120~250w,超声浸提时间为30~60min;超声浸提结束后在-4℃下5000~10000r/min离心20min;然后沉淀部分加入3~5倍的同样的提取剂,重复上述步骤;合并两次离心所得上清液;(2)超滤浓缩:在10~20℃条件下,利用孔径为10kDa~20kDa膜将步骤(1)所得上清液进行超滤浓缩;(3)去脂:将超滤浓缩液转入去脂锅内,于5min内加热到45~55℃,立即在冰水浴中降温至0~5℃,静置3~4h,分离出下层清液;(4)酸解:利用1mol/l盐酸或1mol/l醋酸,将步骤(3)所得下层清夜调节pH至4~6,会有沉淀析出;在-4℃下,以10000r/min的速度离心20min,除去沉淀,收集上清液;(5)离子交换层析:将步骤(4)制得的上清液直接加到阳离子交换柱上,用0.5~2.0mol/L NaCl洗脱,收集含有胰岛素样生长因子-1的洗脱峰溶液,交换柱使用的填料是葡聚糖型或纤维素型弱酸性阳离子交换树脂;(6)第二次超滤:利用孔径为2~6kDa超滤膜将步骤(5)得到的胰岛素样生长因子-1洗脱液进行脱盐、浓缩,收集浓缩液;(7)冷冻干燥:将步骤(6)所得浓缩液在-20℃下预冷冻,然后在-40℃~-60℃下用冷冻干燥机进行干燥。
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