兰花组织培养快速繁殖方法

摘要

本发明公开了一种兰花组织培养快速繁殖方法，其包括诱导培养、增殖及继代培养，诱导培养所用诱导培养基是以改良MS为基本培养基并附加其他成分的半固体培养基；而增殖及继代培养所用培养基则为以改良MS为基本培养基并附加其他成分的液固二相培养基，并结合了控温摇床温和摇动培养，从而实现了高效诱导和增殖、减轻褐化和有效继代的目的，特别适合于兰花的组织培养。

主权项

1.一种兰花组织培养快速繁殖方法，其特征在于包括以下步骤：a、诱导培养；将兰科植物的种子或幼芽接种在诱导培养基上，诱导出芝麻粒大小的初始(类)原球茎；所述诱导培养基是以改良MS为基本培养基并附加其他成分的半固体培养基，具体成分和含量为：KNO31200～1500mg/L、NH4NO31000～350mg/L、KH2PO4110～140mg/L、MgSO4·7H2O230～300mg/L、CaCl2200～280mg/L、KI0.83mg/L、H3BO36.2mg/L、MnSO4·4H2O22.3 mg/L、ZnSO4·7H2O8.6 mg/L、Na2MoO4·2H2O0.25mg/L、CuSO4·5H2O0.025mg/L、CoCl2·6H2O0.025mg/L、Na2·EDTA37.3mg/L、FeSO4·7H2O27.8mg/L、C6H12O6·2H2O100mg/L、NH2·CH2·COOH2mg/L、C12H17ClN4OS·HCl0.1mg/L、C8H11O3N·HCl0.5mg/L、NC5H4COOH0.5mg/L、蔗糖20～30mg/L、6-BA0.01～0.5mg/L、活性炭0.01～0.1％、琼脂糖4～5g/L，pH值5.0～5.4；b、增殖及继代培养；将初始(类)原球茎转接到增殖培养基上进行增殖培养，每隔四周，将增值后的初始(类)原球茎切割后进行继代培养，使(类)原球茎快速增殖，继代培养所用培养基与所述增值培养基相同；所述增殖培养基是以改良MS为基本培养基并附加其他成分的液固二相培养基，其中上层为液相培养基，下层为固相培养基；所述液相培养基的具体成分和含量为：KNO3 600～200mg/L、NH4NO3500～1100mg/L、KH2PO450～120mg/L、MgSO4·7H2O120～250mg/L、CaCl2100～250mg/L、KI0.83mg/L、H3BO36.2mg/L、MnSO4·4H2O22.3mg/L、ZnSO4·7H2O8.6mg/L、Na2MoO4·2H2O0.25mg/L、CuSO4·5H2O0.025mg/L、CoCl2·6H2O0.025mg/L、Na2·EDTA37.3mg/L、FeSO4·7H2O27.8mg/L、C6H12O6·2H2O100mg/L、NH2·CH2·COOH2mg/L、C12H17ClN4OS·HCl0.1mg/L、C8H11O3N·HCl0.5mg/L、NC5H4COOH0.5mg/L、蔗糖30mg/L、6-BA0.1～1mg/L、NAA0.01～0.5 mg/L、活性炭0.1～0.5％、香蕉泥0～100g/L，pH值5.2～5.4；所述固相培养基与所述液相培养基相比，仅在于其还添加有琼脂糖6～7g/L。