盐酸克伦特罗完全抗原及其单克隆抗体的制备方法

摘要

本发明公开了一种盐酸克伦特罗完全抗原及其单克隆抗体的制备方法，首先在酸性条件下与亚硝酸钠反应，得到偶氮化的盐酸克伦特罗，然后在碱性条件下与牛血清白蛋白偶联制备成盐酸克伦特罗完全抗原。通过免疫Balb/c纯系小鼠，经IELISA检测免疫后小鼠的血清合格后，进行细胞融合制备成抗盐酸克伦特罗单克隆抗体。本发明方法制备的盐酸克伦特罗完全抗原，可用来免疫动物。制备的单克隆抗体，可用于检测肉及肉制品、畜类饲料以及兽类屠宰前其体内盐酸克伦特罗残留量。本发明方法获得的盐酸克伦特罗完全抗原中盐酸克伦特罗与牛血清蛋白的偶联率为17，其分子结构式如上。

主权项

1.盐酸克伦特罗完全抗原及其单克隆抗体的制备方法，其特征在于所述盐酸克伦特罗完全抗原的制备方法步骤如下：A)配制1mol/L盐酸溶液，将其置入4℃冰箱中预冷；称取盐酸克伦特罗(CLB)置于烧杯中，缓慢滴加预冷的盐酸溶液，并用玻璃棒搅拌至溶解，然后将溶解完毕的上述溶液放入冰浴锅中；B)将冰浴锅放置于磁力搅拌器上，打开开关，缓慢搅拌，并向烧杯中逐渐滴加30％亚硝酸钠(NaNO2)溶液，滴加NaNO2溶液时用玻璃棒沾取烧杯中少许液滴，用淀粉KI试纸检验，待其变化为深紫色时继续反应45min后，再向烧杯中滴加5％氨基磺酸铵终止反应，得到偶氮化的CLB；C)称取牛血清白蛋白(BSA)300mg于另一烧杯中，缓慢滴加0.01mol/L、pH＝7.2-7.4的磷酸盐缓冲夜(PBS)至完全溶解；D)用滴定管吸取烧杯中偶氮化的CLB溶液，缓慢滴入另一烧杯中溶解的BSA溶液中，玻璃棒搅拌，待反应液颜色变为亮黄色止；E)同时向上述混合液中滴加1mol/L NaOH溶液，使pH值维持在9.0左右，在该烧杯中加入转子后，放置于磁力搅拌器上；F)将该烧杯及磁力搅拌器放入冰箱中，打开磁力搅拌器开关，避光缓慢搅拌24小时，搅拌期间，每间隔1h检测其pH值，滴加NaOH溶液，使pH值维持在9.0左右；G)反应完毕，将样品由玻璃棒导流加入透析袋中，置于0.01M磷酸盐缓冲液(PBS)中透析，3-4h换液一次，透析72h，透析完毕，将得到的盐酸克伦特罗完全抗原样品分装，置于-20℃冰箱中贮藏备用。