春石斛组织培养快繁方法

摘要

春石斛组织培养快繁方法，属于植物快夹繁方法技术领域。其特征在于包括以下步骤：1)选择春石斛幼茎作外植体，幼茎长度为3－5cm；2)外植体的处理；3)在无菌接种室中接种，于无菌培养室中培养10－15天；4)将存活的茎尖转接到诱导培养基上诱导不定芽或原球茎，培养30－40天后转接到增殖培养基中进行增殖培养，培养2－3个月；5)继代生根培养；6)单株移栽到128孔穴盘中。上述春石斛组织培养快繁方法，不受季节约束，四季皆宜，环境容易控制，适合全国各地繁殖，解决了春石斛繁殖难、品种易退化和变异快、种苗参差不齐等问题，生产得到的春石斛种苗品质高，一致性好，具有广阔的市场前景。

主权项

1.春石斛组织培养快繁方法，其特征在于包括以下步骤：1)选择具有较好品种特征且生长健壮的春石斛幼茎作外植体，幼茎长度为3-5cm；2)外植体的处理：剥去幼茎外面节上的叶片，洗净后先用70-75％酒精浸润或擦洗带叶和叶鞘的幼茎，再剥去下部叶和叶鞘，留下包裹茎尖的1-2片叶，在0.1-0.15％升汞中浸泡6-8分钟，然后在8-10％的NaClo溶液中浸泡15-20分钟，最后用蒸馏水洗至无异味；3)切除与消毒剂接触过的外植体切面，在无菌接种室中，采用刀背挤压法挤出茎尖，接种到具有初始培养基的试管中，一个试管接一个茎尖，于无菌培养室中培养10-15天；4)诱导和增殖培养：将存活的茎尖转接到诱导培养基上诱导不定芽或原球茎，培养30-40天后转接到增殖培养基中进行增殖培养，培养2-3个月；5)继代生根培养：a)将步骤4)中生成的不定芽切割成单个的不定芽接入生根培养基中培养，待苗生长至高3-5cm、有5片以上叶片和4-6条根时，进行下步移栽；b)取步骤4)中诱导成的原球茎转接到增殖培养基中进行增殖培养30-40天，再转接到催芽培养基中催芽，生长30-40天后，将其切割成单个的不定芽接入生根培养基中培养，待苗生长至高3-5cm、有5片以上叶片和4-6条根时，进行下步移栽；6)移栽：移栽前5-6天放于大棚中练苗，并提前1-2天把瓶盖全部打开或打开一半，从试管中取出的幼苗用水将附着在根上的培养基冲掉，采用纯水苔作为培养基质，单株移栽到128孔穴盘中；上述采用的培养基分别为初始培养基1/2Ms、诱导培养基1/2Ms+BA1.0+NAA0.5、增殖培养基MS+BA1.5+NAA0.5+CH1g/L+5％香蕉、生根培养基1/2MS+IBA0.3mg/L+10％香蕉、催芽培养基1/2Ms+BA0.2+NAA0.1；所述培养基的pH值为5.4-5.8，并在121-125℃、1.10-1.15Pa的条件下灭菌20-25分钟。