不同产地明党参植物的分子鉴别方法

摘要

本发明涉及不同产地明党参植物的分子鉴别方法。该方法在对不同产地明党参植物进行总DNA提取、PCR扩增、rDNA ITS序列测定、分析等过程的基础上，找到了鉴别不同产地明党参植物的碱基位点。当待检测明党参植物的rDNA ITS序列与本发明公开的各产地明党参的DNA序列相符或有该产地明党参的特异性位点时为该产地的明党参。根据不同产地明党参植物的rDNA ITS序列，设计出可鉴别道地产区(江苏句容)明党参的高特异性鉴别引物，能成功进行道地产区明党参植物的高特异性PCR鉴别。

主权项

1.一种不同产地明党参植物的DNA分子鉴别方法，建立不同产地明党参植物的rDNAITS区，包括部分ITS1序列及完整的5.8S和ITS2的序列数据库及各产地明党参植物的特异性鉴别位点，其特征是按如下步骤进行：(1)总DNA提取取待检明党参植物新鲜的叶片，用无菌水处理后，在液氮中研磨成细粉，用CTAB法提取总DNA，然后用北京莱博生物实验材料研究所生产的DNA纯化回收试剂盒纯化，溶解于灭菌双蒸水中：(2)PCR扩增明党参ITS区扩增的引物为ITS区通用引物ITS4和ITS5，引物序列为：ITS4：5`-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3`，位于18S上；ITS5：5`-GGAAGTAAAAGTCGTAACAAGG-3`，位于26S上；利用该对引物对总DNA进行扩增反应，并以ddH2O代替模版DNA作空白对照；(3)DNA序列测定测序采用PCR产物直接测序法，单向测序，测序引物为PCR扩增引物ITS5，测序反应在ABI 3730全自动测序仪上进行；(4)DNA序列数据分析及植物来源的鉴别待检明党参植物的rDNAITS区的序列一经测定，用对位排列软件(CLUSTAL软件)进行对位排列，并辅以人工校对，用遗传分析软件(MEGA软件)分析待检样品DNA序列与数据库中各序列的差异，通过分析比较，最终判定待检明党参植物的来源。