DC－SIGN启动子荧光素酶报告质粒的构建方法

摘要

本发明公开了DC－SIGN启动子荧光素酶报告质粒的构建方法。通过构建DC－SIGN启动子片段与荧光素酶报告载体pGL3－Basic的重组真核表达质粒DC－promoter－pGL3－Basic，并将该质粒在Hela、Hacat、Wish和HuVEC细胞株中进行表达和活性鉴定，本发明成功构建了DC－promoter－pGL3－Basic DC－SIGN启动子荧光素酶报告质粒。通过在Hela、Hacat、Wish和HuVEC细胞株进行表达和荧光素酶活性检测，证明了DC－SIGN启动子在不同细胞株中表达活性不同，在表皮细胞来源的HaCat和上皮来源的Hela细胞株中表达活性相对较高。

主权项

1.DC-SIGN启动子荧光素酶报告质粒的构建方法，其特征在于下述步骤：(1)参考GeneBank AF209479的DC-SIGN启动子序列，设计DC-SIGN启动子的一对引物，在5’端和3’端分别引入Mlu I和Bgl II识别位点：ACGCGT和AGATCT，用PCR法高保真扩增DC-SIGN启动子片段，并纯化PCR产物，备用；(2)对DC-SIGN启动子片段和它的表达载体pGL3-basic分别进行双酶切，并将纯化后的酶切产物进行连接，连接产物转化DH-5α感受态细胞，挑单个白色菌落扩增，抽提重组质粒DNA，作双酶切鉴定。