一种基于聚合酶链反应高效构建T载体的方法

摘要

本发明公开了一种基于PCR法高效构建T载体的方法，主要是将含有特定限制酶位点的一对寡核苷酸片段引入出发载体(如pUC18)中，此限制酶位点的特点是其相应酶(如EcoRV)能产生平末端，且切点前后碱基分别是T和A。继而用该酶将出发载体线性化后作为PCR模板，设计引物通过单引物PCR扩增或不对称PCR扩增产生单链，然后将两条单链退火形成T载体。利用本方法制备T载体简便、快速，制得的T载体能够高效率地克隆带有“A”尾的PCR产物，其非重组背景几乎为零。

主权项

1.一种基于PCR法高效构建T载体的方法，主要是将含有特定限制酶位点的一对寡核苷酸片段引入出发载体(如pUC18)中，用该酶将此新生载体线性化后作为模板，通过单引物PCR扩增或不对称PCR扩增产生单链，然后将两条单链退火形成T载体。其特征在于：所引入特殊限制酶位点的特点是该酶能产生平末端，且切点前后碱基分别是T和A，如ECoRV，其识别位点是GATATC。