过敏原特异性抗体IgE ELISA检测试剂盒及其制备方法

摘要

本发明公开了过敏原特异性抗体IgE ELISA检测试剂盒及其制备方法，应用纯化的过敏原蛋白包被酶标板。试剂盒组成包括已包被的过敏原蛋白的酶标板、人IgE标准液、酶标记抗体、TMB底物显色液、样品稀释液、浓缩洗涤液和终止反应液。固定在酶标板微孔表面上的抗原捕获样品血清中的特异性IgE抗体，酶标记抗体识别IgE并与之结合，形成抗原－IgE－抗体－酶的复合物，酶与底物反应显色后测出吸光度，由吸光度大于0.165的过敏原孔定性筛查致敏过敏原，而由标准曲线计算出样本血清中的特异性IgE抗体浓度，定量分级确定过敏反应程度，可应用于过敏性疾病的体外临床辅助诊断及科学研究。

主权项

1.过敏原特异性抗体IgE ELISA检测试剂盒，其特征在于该试剂盒组成包括已包被的奶类、蛋类、肉类、谷物类、坚果类、水果类、蔬菜类、水产类、豆类食物过敏原蛋白以及吸入型的螨虫类、动物皮屑类、鸟羽绒类、花粉类、蟑螂类、霉菌类环境过敏原蛋白的酶标板、人IgE标准液、酶标记抗体、TMB底物显色液、样品稀释液、浓缩洗涤液和终止反应液；其中：已包被的奶类食物过敏原蛋白的酶标板包括：牛奶、羊奶；已包被的蛋类食物过敏原蛋白的酶标板包括：家禽蛋白、家禽蛋黄；已包被的肉类食物过敏原蛋白的酶标板包括：猪肉、牛肉、羊肉、鸭肉、鸡肉、鹅肉、火鸡肉、驴肉；已包被的谷物类食物过敏原蛋白的酶标板包括：玉米、小麦、燕麦、大麦、荞麦、大米、小米；已包被的坚果类食物过敏原蛋白的酶标板包括：杏仁、花生、榛子、腰果、核桃、开心果、巴西坚果、芝麻；已包被的水果类食物过敏原蛋白的酶标板包括：西瓜、菠萝、橙子、芒果、香蕉、柑桔、胡柚、柠檬、苹果、葡萄、梨、草莓、桃；已包被的蔬菜类食物过敏原蛋白的酶标板包括：芹菜、菠菜、洋葱、茄子、大蒜、辣椒、土豆、西红柿；已包被的水产类食物过敏原蛋白的酶标板包括：带鱼、黄鱼、比目鱼、三文鱼；鲤鱼、鲫鱼、草鱼、鲢鱼、虾、蟹、蚌、贻贝、牡蛎、黄鳝、鳗鱼；已包被的豆类食物过敏原蛋白的酶标板包括：扁豆、蚕豆、黄豆、豌豆；已包被的吸入型螨虫类过敏原蛋白的酶标板包括：尘螨、粉螨、屋尘；已包被的吸入型动物皮屑类过敏原蛋白的酶标板包括：猫、狗、马、牛、羊；已包被的吸入型鸟羽绒类过敏原蛋白的酶标板包括：鸡、鸭、鹅、鸽；已包被的吸入型花粉类过敏原蛋白的酶标板包括：桦树、枫树、桤树、构树、棕榈、葵树、榛树、柏树、松树、杉木、栗树、栎树、梧桐、杨树、柳树、桑树、榆树、艾蒿、豚草、藜草、车前草、白茅草、牛毛草、狗牙草、梯牧草、芦苇、葎草、苍耳、香蒲、莎车、芨芨草、向日葵；已包被的吸入型蟑螂类过敏原蛋白的酶标板包括：德国小蠊、美洲大蠊；已包被的吸入型霉菌类过敏原蛋白的酶标板包括：点青霉菌、多主枝孢霉菌、烟曲霉菌、交链孢霉菌、黑根霉菌、酿酒酵母菌、小麦黑粉菌、毛霉菌、黑孢霉菌；酶标记抗体：辣根过氧化物酶标记的抗人IgE单克隆抗体；TMB底物显色液：2.08mmol/L 3，3’，5，5’-四甲基联苯胺，12mmol/L过氧化氢，10mmol/L β-环糊精，0.1mol/L pH5.0的醋酸缓冲液。样品稀释液：10mmol/L pH7.4-7.6的磷酸盐缓冲液中含1％BSA，0.05％Tween-20和1mg/L庆大霉素；浓缩洗涤液：0.1mol/L pH7.4-7.6的磷酸盐缓冲液中含1％胎牛血清，0.5％Tween-20和20mg/L庆大霉素；终止反应液：1.0mol/L H2SO4。