突变青霉素G酰化酶、其重组表达质粒及转化的工程菌株

摘要

本发明通过基因定点突变的方法获得的青霉素G酰化酶合成性能提高的基因、突变质粒、工程菌，并可在将工程菌发酵纯化后，获得青霉素G酰化酶合成性能提高的突变酶。本发明先用Kpn I和Pst I双酶切pUC18，然后用T4 polymerase补平，自连得到pZ01；用EcoR I酶切pZ01，再和同样用EcoR I酶切的pEES102连接，获得重组质粒pY020；再以pY020为模板质粒，利用TaKaRa MuTanBEST Kit对B.megaterium PGA进行定点突变，从而获得青霉素G酰化酶合成性能提高的突变质粒。将该突变质粒转化枯草杆菌获得需要的工程菌。将该工程菌放大发酵，纯化后可获得合成产物/水解产物的比值及7－ADCA最大转化率提高的突变酶。

主权项

1.一种青霉素G酰化酶的突变DNA序列，其特征在于，其表达蛋白的氨基酸序列与巨大芽孢杆菌青霉素G酰化酶的氨基酸序列相比，在位点α144上的酪氨酸被精氨酸替代，或位点α145上的苯丙氨酸被丙氨酸、亮氨酸或酪氨酸替代，或位点β24上的缬氨酸被苯丙氨酸替代或以上这些突变位点的组合，以及这些突变位点与其它无义突变或同义突变的组合。