可定向克隆启动子并研究其活性的T载体及其构建方法

摘要

本发明公开了一种可直接定向克隆启动子并研究启动子活性的T载体及其构建方法，包括以下步骤：1)制备含有XcmI盒(或AhdI盒)的前T载体，包括间隔DNA序列即带有与出发载体具有不同抗性基因或其它选择标记的序列，紧密连接于此间隔DNA序列两侧的各一个XcmI酶切位点序列；2)用XcmI酶或XcmI酶同裂酶酶切步骤1)中的前T载体，得到T载体；其中所述步骤1)中的XcmI盒通过PCR扩增得到，在上游引物XcmI酶识别位点中尚包含稀有限制酶PmeI识别位点的前半部分，用于启动子PCR产物的定向克隆分析。本发明中的方法同样适用于普通克隆型T载体和表达型T载体的制备，将在基因工程领域中发挥重要作用。

主权项

1.一种用于克隆启动子的T载体pEGFP-T、pGL3-T和pSEAP2-T的制备方法，包括以下步骤：1)制备含有XcmI盒(或AhdI盒)的前T载体pEGFP-UC、pGL3-UC和pSEAP2-UC，所述XcmI盒包括间隔DNA序列，紧密连接于所述间隔DNA序列两侧的各一个XcmI酶切位点序列；2)用XcmI酶或XcmI酶的同裂酶酶切步骤1)中的前T载体，得到T载体；其特征在于：所述步骤1)中的间隔DNA序列为带有与出发载体具有不同抗性基因或其它选择标记的序列，如构建前T载体pEGFP-UC时所采用的质粒pUC18全序列和构建前T载体pGL3-UC与pSEAP2-UC时所采用的pUC-K序列，pUC-K为发明人自行构建的质粒，其特征为以卡那霉素抗性基因取代pUC18中的氨苄青霉素抗性基因，其余序列与pUC18相同。