牛乳腺炎疫苗的制备方法

摘要

本发明公开了一种牛乳腺炎疫苗的制备方法。本发明提供了利用含有核心通用抗原的革兰氏阴性菌，通过含有蔗糖-6果糖转移酶(sacB)基因质粒的转化，在蔗糖的诱导下，使革兰氏阴性菌自杀，收集这些含有核心通用抗原的革兰氏阴性菌，制备牛乳腺炎的疫苗的方法。本发明牛乳腺炎疫苗的制备方法不会对疫苗的免疫原性造成损害，不会产生替代的或非天然的疫苗抗原，所用的化学诱导物质是食用的无毒的蔗糖。同时可以大大减少疫苗中的内毒素，减少副作用，刺激免疫系统抵御全部的大肠杆菌，沙门氏菌等革兰氏阴性菌所引起的牛乳腺炎。

主权项

1.一种制备牛乳腺炎疫苗的方法，包括如下步骤：a.提取含有蔗糖-6果糖转移酶基因sacB的质粒；b.制备具有革兰氏阴性菌核心通用抗原的革兰氏阴性菌感受态细胞；c.转化步骤a中提取的含有蔗糖-6果糖转移酶基因sacB的质粒进入步骤b所制备的革兰氏阴性菌感受态细胞中；d.鉴定，获得转化的革兰氏阴性菌；e.已转化的革兰氏阴性菌在细菌培养基中生长直到浓度达到105-1012CFU/ml；f.收集步骤e中的已转化的革兰氏阴性菌；g.用蔗糖诱导已转化的革兰氏阴性菌中自杀性蔗糖-6果糖转移酶基因sacB表达，再次收集革兰氏阴性菌；h.重复步骤g两次；i.悬浮革兰氏阴性菌菌体，按佐剂和菌体体积比为3∶2的比例加入佐剂，即得牛乳腺炎疫苗，其每一次免疫量的浓度为8.0×105CFU或以上。