一种利用间充质干细胞联合细胞因子培养破骨细胞的方法

摘要

本发明公开了一种利用间充质干细胞联合细胞因子培养破骨细胞的方法。主要是采用小鼠骨实质来源的间充质干细胞与小鼠脾脏单个核细胞共同培养，再添加核因子κB受体活化子配体和巨噬细胞集落刺激因子培养破骨细胞的方法。本发明方法操作简单，方便实用，可以在最早时间获得破骨细胞，缩短了培养时间；其次本发明方法所得破骨细胞数量多，解决了破骨细胞难以大量制备的问题，可以满足一般细胞生物学实验的需要；还有本发明方法所得的破骨细胞成熟度高，骨质吸收能力强，有利于开展功能研究；另外，本发明方法所需要的细胞因子少，可以节约经费开支。

主权项

1.一种利用间充质干细胞联合细胞因子培养破骨细胞的方法，包括如下步骤：(1)从小鼠骨实质内分离、培养间充质干细胞，并进行传代培养，然后将传代培养的第4～6代间充质干细胞铺于培养板内，在35～38℃、5％CO2条件下培养12～24小时；(2)从小鼠脾脏分离单个核细胞，并种于步骤(1)的培养板内；(3)向步骤(2)中的培养板内添加含细胞因子的培养基共同培养，每隔两天半量换液，在35～38℃、5％CO2条件下培养3～15天，即可得到破骨细胞；其中，步骤(3)所述的培养基为含有1～2mmol/L谷氨酰胺，10～15％体积胎牛血清，10～20ng/ml重组小鼠巨噬细胞刺激因子，10～20ng/ml重组小鼠核因子κB受体活化子配体的a-MEM培养基。