| 摘要 |
Un procedimiento para la mutagénesis de una secuencia polinucleotídica de doble hebra (secuencia madre) de n pares de bases que tiene una hebra (+) y una hebra (-) complementaria, que comprende las etapas (i) creación de una colección de fragmentos de una sola hebra de la hebra (+) de la secuencia madre, en donde todos los miembros de la colección tienen el mismo extremo 5'' y tienen una deleción en el extremo 3'' de modo que la colección representa hebras (+) con una longitud de n-1, n-2, n-3, ... nucleótidos; (ii) introducción de al menos un nucleótido universal o degenerado en el extremo 3'' de la hebra (+) producida en la etapa (i); (iii) elongación de la hebra (+) producida en la etapa (ii) hasta la longitud completa de la secuencia madre usando la hebra (-) o fragmentos de la misma como una hebra de plantilla para la elongación; (iv) síntesis de una hebra (-) usando la hebra (+) producida en la etapa (iii) como un hebra de plantilla, efectuando de ese modo mutaciones en la hebra (-) en las posiciones de los nucleótidos universales o degenerados previos en comparación con la secuencia madre.
|
