一种可制作标准曲线的临床定量检测基因芯片方法

摘要

本发明涉及一种可制作标准曲线的临床定量检测基因芯片方法，属于生物技术领域。本发明的方法包括衍生DNA的设计、人工合成衍生DNA、衍生DNA的克隆、芯片制作、基因芯片上标准曲线的制作、临床样本的定量检测等步骤。方法用一段HIV的检测靶分子作试验，可以获得相关系数大于0.99的标准曲线。用已知浓度的检测靶分子进行测试，测定结果与加入的DNA量是一致的。本发明的方法与其他常规定量方法比较，可以节省成本，测定结果更准确。同时，本发明的方法可将基因芯片的高通量检测与定量检测结合，扩大基因芯片的应用范围。

主权项

1.一种可制作标准曲线的临床定量检测基因芯片方法，其特征在于该方法的步骤如下：a.衍生DNA的的设计：选择与检测靶分子DNA有不同碱基排列顺序，但检测效率与检测靶分子相同的衍生DNA，用该衍生DNA作为标准曲线制作的标准品，每1个被检测的靶分子DNA有5-7条衍生DNA序列，衍生DNA的条数与标准曲线制作时标准品的浓度梯度数一致；b.人工合成衍生DNA：用化学方法全合成，或用化学方法合成多条短分子，再用PCR方法拼接得到衍生DNA；c.衍生DNA的克隆：合成的衍生DNA克隆到T-载体上，鉴定测序序列是否与设计DNA序列一致.鉴定后的衍生DNA克隆进行质粒扩增，保存备用；d.芯片制作：芯片上的探针DNA片段不包括检测时的PCR扩增引物序列，需针对每一条衍生DNA序列以及检测靶分子设计一对PCR扩增引物，再用PCR方法扩增衍生DNA和检测靶分子DNA的探针部分的片段，将这些探针DNA按常规基因芯片制作方法制作成DNA阵列的基因芯片；e.基因芯片上标准曲线的制作：用衍生DNA的质粒克隆作模板，用质粒上插入位点附近的序列作引物，通过PCR扩增方式获得线状的衍生DNA序列作为标准品DNA，通过紫外方法定量后确定各标准品的浓度，再计算其分子拷贝数；f.检测时，将标准品DNA混合，混合物中不同的标准品的浓度成梯度，与待检测样本一起反应，不同标准品与相应的探针杂交，根据浓度与测定值之间的关系，即可制作标准曲线；待测样本的测定值在标准曲线上可查到相应的浓度，即可进行临床样本的定量检测。