利用金磁微粒分离mRNA的方法

摘要

本发明涉及生物技术领域，尤其是涉及一种利用金磁微粒分离mRNA的方法。其技术解决方案为：该方法包括以下步骤：1)链亲和素－金磁微粒的制备；2)将生物素标记的oligo(dT)探针和链亲和素－金磁微粒混合，通过链亲和素－生物素的结合，将生物素化的oligo(dT)探针固定于磁粒表面，作为反应和分离的固相载体；3)使oligo(dT)探针和mRNA polyA发生特异性杂交，磁性分离，弃上清；4)加入清洗缓冲液清洗磁粒，除去杂质；5)加入洗脱缓冲液，洗脱mRNA。本发明具有成本低廉、简便、分离快捷的优点。

主权项

1.一种利用金磁微粒分离mRNA的方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：1)链亲和素-金磁微粒的制备；1.1)取金磁微粒，以偶联缓冲液平衡1～3次，按20～500μg/(mg磁粒)的比例加入链亲和素，在20～40℃的条件下充分混匀，反应5min～2h，用清洗缓冲液清洗，除去未结合的链亲和素，加入保存缓冲液保存备用；2)将生物素标记的oligo(dT)探针和链亲和素-金磁微粒混合，通过链亲和素-生物素的结合，将生物素化的oligo(dT)探针固定于磁粒表面，作为反应和分离的固相载体；2.1)取链亲和素-金磁微粒，以偶联缓冲液平衡1～3次，按0.5～6nmol/(mg磁粒)加入生物素标记的oligo(dT)探针，在20～40℃的条件下充分混匀，反应5min～2h，用清洗缓冲液清洗，除去未结合的oligo(dT)探针；2.3)加入封闭剂在20～40℃的条件下充分混匀，反应30min～12h，封闭磁粒，然后用清洗缓冲液充分洗涤磁粒，除去未结合的封闭剂，加入保存缓冲液保存备用；3)将RNA溶于无核糖核酸酶的水中，在50～70℃的条件下放置3～15min，立即加入高盐溶液，使盐终浓度达到0.1～2M，混匀后按10～1000μg总RNA/(mg磁粒)加入到用杂交缓冲液平衡的固定有oligo(dT)探针的金磁微粒中，在20～40℃的条件下放置3～15min，使oligo(dT)探针和mRNA polyA发生特异性杂交，磁性分离，弃上清；4)加入清洗缓冲液清洗磁粒，除去杂质；5)加入洗脱缓冲液，洗脱mRNA。