一种喹诺酮类抗生素多簇抗原的合成方法

摘要

一种喹诺酮类抗生素多簇抗原的合成方法，属于生物化工技术领域。本发明以诺氟沙星为原料，经过诺氟沙星的衍生化和羧基保护制备半抗原N－2－乙胺－诺氟沙星，再偶联蛋白合成喹诺酮类抗生素多簇抗原N－2－乙胺－诺氟沙星－牛血清蛋白。本发明成功合成了喹诺酮类抗生素多簇抗原，合成步骤简洁，经过提纯后处理，纯度可达到99％以上，完全可以用作喹诺酮类多簇酶联免疫试剂盒的应用，为今后人们的研究提供了方便的途径，可以满足国内对其研究的需要。

主权项

1.一种喹诺酮类抗生素多簇抗原的合成方法，其特征是以诺氟沙星为原料将其衍生化制备半抗原，进而再与牛血清蛋白采用戊二醛法偶联合成抗原；工艺步骤为：(1)人工半抗原的合成合成路线：产物1的合成：2-溴乙胺氢溴酸盐和碳酸二叔丁酯Boc₂O反应，配比控制为碳酸二叔丁酯摩尔比过量20％，以甲醇为反应介质，三乙胺为催化剂，搅拌、加热升温到60℃，反应1h，然后室温反应过夜；反应液真空浓缩，残液溶于二氯甲烷，依次用0.5N的盐酸、饱和食盐水和饱和的NaHCO₃溶液洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，浓缩，得淡黄色液体产物1，直接用于下一步反应；产物2的合成：产物1和诺氟沙星反应，控制配比为产物1摩尔比过量20％，以二甲基甲酰胺为反应介质，三乙胺为催化剂，搅拌、加热升温到80℃，反应过夜，冷至室温，滴加0.5N的盐酸控制pH6，搅拌使体系重新冷却到室温，过滤，依次用蒸馏水、无水乙醇洗涤虑饼，干燥，得粗产品产物2，用乙醇重结晶；产物3的合成：产物2和三氟乙酸反应，脱碳酸二叔丁酯基：室温搅拌反应3小时，真空浓缩，将残留物溶于乙醇，加入三乙胺，静止，过滤得到的粗品用乙醇和氯仿重结晶提纯，得产物3半抗原，命名为N-2-乙胺-诺氟沙星；(2)人工抗原的合成合成路线：透析袋的前处理：取5-10cm的透析袋，于沸水中煮沸5min，再用60℃的去离子水冲洗3min，保存在4℃去离子水中备用；磷酸盐缓冲溶液的配置：0.2Mol/L磷酸二氢钠19mL和0.2Mol/L磷酸氢二钠81mL加水至2000mL混合即为pH7.4的磷酸盐缓冲液；偶联蛋白：取0.1mmol的产物3溶于2mL的pH7.4的磷酸盐缓冲液中，搅拌下缓慢滴加戊二醛溶液，滴加至溶液的戊二醛最终质量浓度为1.25％，成A液；取0.002mmol的牛血清蛋白溶于10mL的pH7.4的磷酸盐缓冲溶液中成B液；搅拌条件下将A液缓慢滴加到B液中，搅拌过夜，磷酸盐缓冲液中透析5天，得人工抗原N-2-乙胺-诺氟沙星-牛血清蛋白；(3)抗原鉴定：N-2-乙胺-诺氟沙星-牛血清蛋白采用紫外扫描测定其偶联比，分别在262nm、278nm处测吸光值，并计算其偶联比。